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[交流]
【求助/交流】芽孢染色做不出来，望高人指点
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| 我最近在做一个芽孢杆菌的芽孢染色，用的方法是先用5%孔雀绿加热染色5min，水洗，番红复染。结果是菌体全是红色， 芽孢看不出来。有些时候水洗的不够，全是绿色，红色看不出来，急需解决，望高人指点。 |
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10楼2010-11-23 09:38:12
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gao-feng(金币+1):谢谢参与
lstt09nk(金币+5):辛苦 2010-11-23 09:49:26
gao-feng(金币+1):很详细啊，但壁纸是不是你的经验，这些方法我在实验书上见过，也照着做过，就是做不好。 2010-11-23 09:56:57
gao-feng(金币+1):谢谢参与
lstt09nk(金币+5):辛苦 2010-11-23 09:49:26
gao-feng(金币+1):很详细啊，但壁纸是不是你的经验，这些方法我在实验书上见过，也照着做过，就是做不好。 2010-11-23 09:56:57
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基本原理 芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染料的亲合力不同的原理，用不同染料进行着色，使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区别。 芽孢壁厚、透性低，着色、脱色均较困难，因此，当先用一弱碱性染料，如孔雀绿（malachite green）或碱性品红（basicfuchsin）在加热条件下进行染色时，此染料不仅可以进入菌体，而且也可以进入芽孢，进入菌体的染料可经水洗脱色，而进入芽孢的染料则难以透出，若再用复染液（如番红液）或衬托溶液（如黑色素溶液）处理，则菌体和芽孢易于区分。 方法1 （Schaeffer-Fulton氏染色法） （1）将培养24小时左右的枯草芽孢杆菌或其他芽孢杆菌，作涂片、干燥、固定。 （2）滴加3—5滴孔雀绿染液于已固定的涂片上。 （3）用木夹夹住载玻片在火焰上加热，使染液冒蒸汽但勿沸腾，切忌使染液蒸干，必要时可添加少许染液。加热时间从染液冒蒸汽时开始计算约4—5分钟。这一步也可不加热，改用饱和的孔雀绿水溶液（约7．6％）染10分钟。 （4）倾去染液，待玻片冷却后水洗至孔雀绿不再褪色为止。 （5）用番红水溶液复染1分钟，水洗至水为无色。 （6）待干燥后，置油镜观察，芽孢呈绿色，菌体呈红色。 注意 （1）选用适当菌龄的菌种，幼龄菌尚未形成芽孢，而老龄菌芽孢囊已经破裂。 （2）加热染色时必须维持在染液冒蒸汽的状态，加热沸腾会导致菌体或芽孢囊破裂，加热不够则芽孢难以着色。 方法2 （改良的Schaeffer-Fulton氏染色法） （1） 制备菌悬液 加1-2滴水于小试管中，用接种挑取2-3环菌苔于试管中，搅拌均匀，制成浓的菌悬液。所用菌种应掌握菌龄，以大部分细菌已形成孢囊为宜；取菌不宜太少。 （2） 染色 加孔雀绿2-3滴于小试管中，使其与菌液混合均匀，然后将试管置于沸水浴烧杯中，加热染色15-20分钟。 （3） 涂片固定 用接种环挑取试管底部菌液数环于洁净载玻片上，涂成薄膜，然后将涂片通过火焰3次，温热固定。 （4） 脱色 水洗，直至流出的水无绿色为止。 （5） 复染 用番红染液染色2-3分钟，倾去染液并用滤纸吸干残液。 （6） 镜检 干燥后，用油镜观察。 芽孢呈绿色，芽孢囊及营养体呈红色。 |
11楼2010-11-23 09:48:13
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