应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】芽孢染色做不出来，望高人指点
21/1返回列表
查看: 3569  |  回复: 21
查看全部回帖@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

gao-feng

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】芽孢染色做不出来，望高人指点

我最近在做一个芽孢杆菌的芽孢染色，用的方法是先用5%孔雀绿加热染色5min，水洗，番红复染。结果是菌体全是红色， 芽孢看不出来。有些时候水洗的不够，全是绿色，红色看不出来，急需解决，望高人指点。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼2010-11-21 10:54:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dyszz

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
gao-feng(金币+1):谢谢参与
lstt09nk(金币+5):辛苦 2010-11-23 09:49:26
gao-feng(金币+1):很详细啊，但壁纸是不是你的经验，这些方法我在实验书上见过，也照着做过，就是做不好。 2010-11-23 09:56:57
基本原理    芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染料的亲合力不同的原理，用不同染料进行着色，使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区别。
芽孢壁厚、透性低，着色、脱色均较困难，因此，当先用一弱碱性染料，如孔雀绿（malachite green）或碱性品红（basicfuchsin）在加热条件下进行染色时，此染料不仅可以进入菌体，而且也可以进入芽孢，进入菌体的染料可经水洗脱色，而进入芽孢的染料则难以透出，若再用复染液（如番红液）或衬托溶液（如黑色素溶液）处理，则菌体和芽孢易于区分。

方法1  （Schaeffer-Fulton氏染色法）
　　（1）将培养24小时左右的枯草芽孢杆菌或其他芽孢杆菌，作涂片、干燥、固定。
　　（2）滴加3—5滴孔雀绿染液于已固定的涂片上。
　　（3）用木夹夹住载玻片在火焰上加热，使染液冒蒸汽但勿沸腾，切忌使染液蒸干，必要时可添加少许染液。加热时间从染液冒蒸汽时开始计算约4—5分钟。这一步也可不加热，改用饱和的孔雀绿水溶液（约7．6％）染10分钟。
　　（4）倾去染液，待玻片冷却后水洗至孔雀绿不再褪色为止。
　　（5）用番红水溶液复染1分钟，水洗至水为无色。
　　（6）待干燥后，置油镜观察，芽孢呈绿色，菌体呈红色。
　　注意
　　（1）选用适当菌龄的菌种，幼龄菌尚未形成芽孢，而老龄菌芽孢囊已经破裂。
　　（2）加热染色时必须维持在染液冒蒸汽的状态，加热沸腾会导致菌体或芽孢囊破裂，加热不够则芽孢难以着色。
　　
方法2  （改良的Schaeffer-Fulton氏染色法）
（1）        制备菌悬液   加1-2滴水于小试管中，用接种挑取2-3环菌苔于试管中，搅拌均匀，制成浓的菌悬液。所用菌种应掌握菌龄，以大部分细菌已形成孢囊为宜；取菌不宜太少。
（2）        染色        加孔雀绿2-3滴于小试管中，使其与菌液混合均匀，然后将试管置于沸水浴烧杯中，加热染色15-20分钟。
（3）        涂片固定    用接种环挑取试管底部菌液数环于洁净载玻片上，涂成薄膜，然后将涂片通过火焰3次，温热固定。
（4）        脱色        水洗，直至流出的水无绿色为止。
（5）        复染        用番红染液染色2-3分钟，倾去染液并用滤纸吸干残液。
（6）        镜检        干燥后，用油镜观察。 芽孢呈绿色，芽孢囊及营养体呈红色。
赞一下(2人) 回复此楼
11楼2010-11-23 09:48:13
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 gao-feng 的主题更新
21/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复(可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭