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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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shangyufang

木虫 (小有名气)


[交流] 请教芽孢杆菌的染色方法

如题,请教高手有关芽孢杆菌的染色方法,如选用的染色试剂(含浓度)种类,使用先后顺序及有关的注意事项等。本人是跨专业背景,请微生物专业的高人指点一下哈,谢过谢过!
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hzlatqh

银虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
2462065楼: Originally posted by 好喳喳 at 2012-12-04 19:51:49
看得好清晰呀,可以透露是什么菌吗?
  在什么时期进行的染色(对数期、稳定期)?
  是显微镜放大多少倍观看的?
  ...

图我从网上找来的。。。时期不确定,倍数得1000倍了吧
8楼2012-12-05 17:09:56
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查看全部 9 个回答

springTT

金虫 (正式写手)


★ ★ ★ ★
shangyufang(金币+1):谢谢参与
amisking(金币+3): 鼓励应助 2011-06-01 21:00:12
最常用的革兰氏染色法。芽孢杆菌属于革兰氏阳性菌。
革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤,具体操作方法是:
  1)涂片固定。
  2)草酸铵结晶紫染1分钟。
  3)自来水冲洗。
  4)加碘液覆盖涂面染约1分钟。
  5)水洗,用吸水纸吸去水分。
  6)加95%酒精数滴,并轻轻摇动进行脱色,20秒后水洗,吸去水分。
  7)蕃红染色液(稀)染2分钟后,自来水冲洗。干燥,镜检。
希望对你有参考价值
2楼2011-06-01 19:55:51
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zhang860215

金虫 (正式写手)



shangyufang(金币+1):谢谢参与
shangyufang(金币+1): 非常感谢详细的解答。今天就参照此法来试一下。 2011-06-02 09:47:47
上面的革兰氏染色主要是针对细胞体的,要想看到芽孢必需得芽孢染色以下为两种方法:
 方法1、   (1)将培养24小时左右的枯草芽孢杆菌或其他芽孢杆菌,作涂片、干燥、固定。   (2)滴加3—5滴孔雀绿染液于已固定的涂片上。   (3)用木夹夹住载玻片在火焰上加热,使染液冒蒸汽但勿沸腾,切忌使染液蒸干,必要时可添加少许染液。加热时间从染液冒蒸汽时开始计算约4—5分钟。这一步也可不加热,改用饱和的孔雀绿水溶液(约7.6%)染10分钟。   (4)倾去染液,待玻片冷却后水洗至孔雀绿不再褪色为止。   (5)用番红水溶液复染1分钟,水洗至水为无色。   (6)待干燥后,置油镜观察,芽孢呈绿色,菌体呈红色。   注意   (1)选用适当菌龄的菌种,幼龄菌尚未形成芽孢,而老龄菌芽孢囊已经破裂。   (2)加热染色时必须维持在染液冒蒸汽的状态,加热沸腾会导致菌体或芽孢囊破裂,加热不够则芽孢难以着色。   
方法2、   (1)取二支洁净的小试管,分别加入0.2ml无菌水,再往一管中加入1—2接种环的蜡状芽孢杆菌的菌苔,另一管中加入1—2接种环的生孢梭菌的菌苔,两管各自充分混合成浓厚的菌悬液。   (2)在菌悬液中分别加入0.2ml苯酚品红溶液,充分混合后,于沸水浴中加热3—5分钟。   (3)用接种环分别取上述混合液2—3环于两片载玻片上,涂薄,风干后,将载玻片稍倾斜于烧杯上,用95%乙醇冲洗至无红色液流出。   (4)再用自来水冲洗,滤纸吸干。   (5)取1—2接种环黑色素溶液于涂片处,立即展开涂薄,自然干燥后,油镜观察,在淡紫灰色背景的衬托下,菌体为白色,菌体内的芽孢为红色。
3楼2011-06-01 21:31:48
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小嫩瓜

木虫 (小有名气)



shangyufang(金币+1):谢谢参与
用革兰氏染色就行。可参考《工业微生物实验技术手册》诸葛健 王正祥 编著
上满试剂配法以及操作步骤都有的。

好运!
4楼2011-06-02 08:18:50
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