应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】芽孢杆菌属的基因敲除方法
131/2返回列表12下一页
查看: 2845  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

hkfgwww

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】芽孢杆菌属的基因敲除方法 已有1人参与

大肠杆菌的基因敲除方法已经很成熟，例如RED重组系统。现在正准备做芽孢杆菌属的基因敲除，碍于学识有限，大家能够提出一些意见及注意事项吗？
包括敲除系统；
敲除使用的方法；
常见使用的质粒等载体。
国内外成功的案例，只要是指工业生产菌的敲除。
欢迎讨论，谢谢。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
微生物发酵
1楼 2010-09-06 20:17:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

fjt198719

木虫 (著名写手)

永远的菜鸟
hkfgwww(金币+2):非常感谢 2010-10-23 10:08:20
芽胞杆菌转化都很困难别说敲除了，主要是因为自身的修饰系统会对外源质粒进行降解。我实验进展到目前，只构建了2株穿梭表达工程菌。我师姐有用古老的spizizen方法整合成功过，我没成功过，就是利用芽胞杆菌对数期自身的感受性来转化。
我现在用的转化是澳大利亚的经典转化方法，Gang-Ping Xue，Journal of Microbiological Methods 34 (1999) 183–191。效率很好。
另外德国一个研究所连续发了3篇文章都是关于芽胞杆菌转化及转化后研究的文章，你可以看看。Appl Microbiol Biotechnol (2008) 78:181–188，Bianca Waschkau，这是其中一篇
赞一下(3人) 回复此楼
独YY不如众YY！！！
10楼2010-10-22 19:23:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fjt198719

木虫 (著名写手)

永远的菜鸟
hkfgwww(金币+1):谢谢 2010-10-23 10:08:58
另外敲除所用质粒的话，可以用温敏型的如pE194了，不过这个质粒只能在芽胞杆菌中复制，所以要改造。另外可以直接用大肠质粒构建，然后单酶切用线性质粒转化，这样整合效果好，不过由于大肠质粒不能复制，也就是说转化和敲除必须一步成功，这样效率就更低了，不过我师姐就是这样成功的，相信肯定行
赞一下(1人) 回复此楼
独YY不如众YY！！！
12楼2010-10-22 19:32:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

super7103

新虫 (初入文坛)
★
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-09-08 23:45:21
hkfgwww(金币+1): 2010-09-11 18:54:40
sigma 有专门的基因敲除的试剂盒
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-09-08 22:17:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

285459331

铁虫 (小有名气)
★ ★
scelab(金币+2):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-09-09 22:56:19
hkfgwww(金币+4): 2010-09-11 18:54:36
敲除一般采用温敏性滚环复制质粒进行质粒转化，或者利用噬菌体转导技术。质粒转化的方法一般采用电转化，效率高，技术也相对成熟。
赞一下(1人) 回复此楼
生命不止，奋斗不息
3楼2010-09-09 22:41:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hkfgwww

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 285459331 at 2010-09-09 22:41:52:
敲除一般采用温敏性滚环复制质粒进行质粒转化，或者利用噬菌体转导技术。质粒转化的方法一般采用电转化，效率高，技术也相对成熟。

能举个具体的例子吗?文献也行。谢谢。
赞一下 回复此楼
微生物发酵
4楼2010-09-11 18:57:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gadwillwin

铜虫 (小有名气)
我也是有这个打算，有什么比较常用的质粒载体推荐一下吗？？？？
赞一下 回复此楼
5楼2010-09-13 18:55:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

梦想起飞

铜虫 (小有名气)
楼主和我一样，我做类芽孢杆菌基因敲除，和楼主所需要的资料一样，找到后能分享一下吗？谢谢
赞一下 回复此楼
6楼2010-09-17 17:59:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hkfgwww

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 梦想起飞 at 2010-09-17 17:59:31:
楼主和我一样，我做类芽孢杆菌基因敲除，和楼主所需要的资料一样，找到后能分享一下吗？谢谢

进展不大，没几个愿意说的
赞一下 回复此楼
微生物发酵
7楼2010-10-15 17:16:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shangming

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
hkfgwww(金币+2):hkfgwww@sina.com 2010-10-22 19:02:03
看天(金币+4):新人鼓励 常来交流 2010-10-22 19:05:22
给我个邮箱，我发你篇文献
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2010-10-22 16:02:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hkfgwww

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by shangming at 2010-10-22 16:02:05:
给我个邮箱，我发你篇文献

hkfgwww@sina.com
赞一下 回复此楼
微生物发酵
9楼2010-10-22 19:02:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hkfgwww 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿吉林大学材料学硕321求调剂 +6 Ymlll 2026-03-18 9/450 2026-03-19 10:28 by 星空星月
[考研] 一志愿985，本科211，0817化学工程与技术319求调剂 +10 Liwangman 2026-03-15 10/500 2026-03-19 10:25 by 无际的草原
[考研] 311求调剂 +4 冬十三 2026-03-18 4/200 2026-03-18 21:47 by 尽舜尧1
[考研] 344求调剂 +6 knight344 2026-03-16 7/350 2026-03-18 20:13 by walc
[考研] 一志愿中国海洋大学，生物学，301分，求调剂 +4 1孙悟空 2026-03-17 4/200 2026-03-18 17:59 by fivewind
[考研] 一志愿武理材料305分求调剂 +5 想上岸的鲤鱼 2026-03-18 6/300 2026-03-18 17:53 by 无际的草原
[考研] 295求调剂 +3 一志愿京区211 2026-03-18 5/250 2026-03-18 17:03 by zhaoqian0518
[考研] 收复试调剂生 +4 雨后秋荷 2026-03-18 4/200 2026-03-18 14:16 by elevennnne
[考研] 环境工程调剂 +8 大可digkids 2026-03-16 8/400 2026-03-18 09:36 by zhukairuo
[考研] 278求调剂 +5 烟火先于春 2026-03-17 5/250 2026-03-18 08:43 by 星空星月
[考研] 293求调剂 +11 zjl的号 2026-03-16 16/800 2026-03-18 08:10 by zhukairuo
[考研] 277调剂 +5 自由煎饼果子 2026-03-16 6/300 2026-03-17 19:26 by 李leezz
[考研] 290求调剂 +3 p asserby. 2026-03-15 4/200 2026-03-17 16:35 by wangkm
[考研] 290求调剂 +6 孔志浩 2026-03-12 11/550 2026-03-17 14:41 by 周舟舟77
[考研] 一志愿，福州大学材料专硕339分求调剂 +3 木子momo青争 2026-03-15 3/150 2026-03-17 07:52 by laoshidan
[考研] 283求调剂 +3 听风就是雨； 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:41 by 热情沙漠
[考研] 304求调剂 +4 ahbd 2026-03-14 4/200 2026-03-16 16:48 by 我的船我的海
[考研] 一志愿华中师范071000，325求调剂 +6 RuitingC 2026-03-12 6/300 2026-03-16 14:50 by 可淡不可忘
[考研] 复试调剂 +4 z1z2z3879 2026-03-14 5/250 2026-03-14 16:30 by JourneyLucky
[考研] 招收0805（材料）调剂 +3 18595523086 2026-03-13 3/150 2026-03-14 00:33 by 123%、
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭