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银虫 (正式写手)

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[交流] 【求助/交流】芽孢杆菌属的基因敲除方法已有1人参与

大肠杆菌的基因敲除方法已经很成熟，例如RED重组系统。现在正准备做芽孢杆菌属的基因敲除，碍于学识有限，大家能够提出一些意见及注意事项吗？
包括敲除系统；
敲除使用的方法；
常见使用的质粒等载体。
国内外成功的案例，只要是指工业生产菌的敲除。
欢迎讨论，谢谢。

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微生物发酵

1楼2010-09-06 20:17:11

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fjt198719

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hkfgwww(金币+2):非常感谢 2010-10-23 10:08:20

芽胞杆菌转化都很困难别说敲除了，主要是因为自身的修饰系统会对外源质粒进行降解。我实验进展到目前，只构建了2株穿梭表达工程菌。我师姐有用古老的spizizen方法整合成功过，我没成功过，就是利用芽胞杆菌对数期自身的感受性来转化。
我现在用的转化是澳大利亚的经典转化方法，Gang-Ping Xue，Journal of Microbiological Methods 34 (1999) 183–191。效率很好。
另外德国一个研究所连续发了3篇文章都是关于芽胞杆菌转化及转化后研究的文章，你可以看看。Appl Microbiol Biotechnol (2008) 78:181–188，Bianca Waschkau，这是其中一篇