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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】芽孢杆菌属的基因敲除方法
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hkfgwww

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】芽孢杆菌属的基因敲除方法 已有1人参与

大肠杆菌的基因敲除方法已经很成熟，例如RED重组系统。现在正准备做芽孢杆菌属的基因敲除，碍于学识有限，大家能够提出一些意见及注意事项吗？
包括敲除系统；
敲除使用的方法；
常见使用的质粒等载体。
国内外成功的案例，只要是指工业生产菌的敲除。
欢迎讨论，谢谢。
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微生物发酵
1楼 2010-09-06 20:17:11
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

fjt198719

木虫 (著名写手)

永远的菜鸟
hkfgwww(金币+2):非常感谢 2010-10-23 10:08:20
芽胞杆菌转化都很困难别说敲除了，主要是因为自身的修饰系统会对外源质粒进行降解。我实验进展到目前，只构建了2株穿梭表达工程菌。我师姐有用古老的spizizen方法整合成功过，我没成功过，就是利用芽胞杆菌对数期自身的感受性来转化。
我现在用的转化是澳大利亚的经典转化方法，Gang-Ping Xue，Journal of Microbiological Methods 34 (1999) 183–191。效率很好。
另外德国一个研究所连续发了3篇文章都是关于芽胞杆菌转化及转化后研究的文章，你可以看看。Appl Microbiol Biotechnol (2008) 78:181–188，Bianca Waschkau，这是其中一篇
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独YY不如众YY！！！
10楼2010-10-22 19:23:09
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fjt198719

木虫 (著名写手)

永远的菜鸟
hkfgwww(金币+1):谢谢 2010-10-23 10:08:58
另外敲除所用质粒的话，可以用温敏型的如pE194了，不过这个质粒只能在芽胞杆菌中复制，所以要改造。另外可以直接用大肠质粒构建，然后单酶切用线性质粒转化，这样整合效果好，不过由于大肠质粒不能复制，也就是说转化和敲除必须一步成功，这样效率就更低了，不过我师姐就是这样成功的，相信肯定行
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独YY不如众YY！！！
12楼2010-10-22 19:32:07
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普通回帖

super7103

新虫 (初入文坛)
★
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-09-08 23:45:21
hkfgwww(金币+1): 2010-09-11 18:54:40
sigma 有专门的基因敲除的试剂盒
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2楼2010-09-08 22:17:17
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285459331

铁虫 (小有名气)
★ ★
scelab(金币+2):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-09-09 22:56:19
hkfgwww(金币+4): 2010-09-11 18:54:36
敲除一般采用温敏性滚环复制质粒进行质粒转化，或者利用噬菌体转导技术。质粒转化的方法一般采用电转化，效率高，技术也相对成熟。
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生命不止，奋斗不息
3楼2010-09-09 22:41:52
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hkfgwww

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 285459331 at 2010-09-09 22:41:52:
敲除一般采用温敏性滚环复制质粒进行质粒转化，或者利用噬菌体转导技术。质粒转化的方法一般采用电转化，效率高，技术也相对成熟。

能举个具体的例子吗?文献也行。谢谢。
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微生物发酵
4楼2010-09-11 18:57:10
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gadwillwin

铜虫 (小有名气)
我也是有这个打算，有什么比较常用的质粒载体推荐一下吗？？？？
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5楼2010-09-13 18:55:44
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梦想起飞

铜虫 (小有名气)
楼主和我一样，我做类芽孢杆菌基因敲除，和楼主所需要的资料一样，找到后能分享一下吗？谢谢
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6楼2010-09-17 17:59:31
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hkfgwww

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 梦想起飞 at 2010-09-17 17:59:31:
楼主和我一样，我做类芽孢杆菌基因敲除，和楼主所需要的资料一样，找到后能分享一下吗？谢谢

进展不大，没几个愿意说的
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微生物发酵
7楼2010-10-15 17:16:32
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shangming

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
hkfgwww(金币+2):hkfgwww@sina.com 2010-10-22 19:02:03
看天(金币+4):新人鼓励 常来交流 2010-10-22 19:05:22
给我个邮箱，我发你篇文献
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8楼2010-10-22 16:02:05
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hkfgwww

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by shangming at 2010-10-22 16:02:05:
给我个邮箱，我发你篇文献

hkfgwww@sina.com
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微生物发酵
9楼2010-10-22 19:02:20
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