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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】芽孢杆菌属的基因敲除方法
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hkfgwww

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】芽孢杆菌属的基因敲除方法已有1人参与

大肠杆菌的基因敲除方法已经很成熟，例如RED重组系统。现在正准备做芽孢杆菌属的基因敲除，碍于学识有限，大家能够提出一些意见及注意事项吗？
包括敲除系统；
敲除使用的方法；
常见使用的质粒等载体。
国内外成功的案例，只要是指工业生产菌的敲除。
欢迎讨论，谢谢。
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微生物发酵
1楼2010-09-06 20:17:11
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fjt198719

木虫 (著名写手)

永远的菜鸟
hkfgwww(金币+1):谢谢 2010-10-23 10:08:58
另外敲除所用质粒的话，可以用温敏型的如pE194了，不过这个质粒只能在芽胞杆菌中复制，所以要改造。另外可以直接用大肠质粒构建，然后单酶切用线性质粒转化，这样整合效果好，不过由于大肠质粒不能复制，也就是说转化和敲除必须一步成功，这样效率就更低了，不过我师姐就是这样成功的，相信肯定行
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独YY不如众YY！！！
12楼2010-10-22 19:32:07
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super7103

新虫 (初入文坛)
★
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-09-08 23:45:21
hkfgwww(金币+1): 2010-09-11 18:54:40
sigma 有专门的基因敲除的试剂盒
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2楼2010-09-08 22:17:17
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285459331

铁虫 (小有名气)
★ ★
scelab(金币+2):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-09-09 22:56:19
hkfgwww(金币+4): 2010-09-11 18:54:36
敲除一般采用温敏性滚环复制质粒进行质粒转化，或者利用噬菌体转导技术。质粒转化的方法一般采用电转化，效率高，技术也相对成熟。
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生命不止，奋斗不息
3楼2010-09-09 22:41:52
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hkfgwww

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 285459331 at 2010-09-09 22:41:52:
敲除一般采用温敏性滚环复制质粒进行质粒转化，或者利用噬菌体转导技术。质粒转化的方法一般采用电转化，效率高，技术也相对成熟。

能举个具体的例子吗?文献也行。谢谢。
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微生物发酵
4楼2010-09-11 18:57:10
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