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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 为什么考马斯亮蓝染色能看到我要的条带，weston却看不到呢？
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zhcosa

金虫 (小有名气)
有没有阳性对照？

转膜后丽春红染一下确定转膜是否成功。再用阳性对照确认一抗、二抗能否正常工作。
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11楼2011-06-23 14:19:42
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小新3858

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by zsy1106 at 2011-06-22 10:16:29:
考染没问题只能说明跑胶的步骤应该是没问题的，但western（楼主拼错啦）做不出来就有很多可能了：
转膜步骤：滤纸、胶、膜顺序有没有放错？
               气泡有没有赶干净？
               电极有没有插 ...

非常感谢
有些问题也考虑过，决定再做一次试试
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12楼2011-06-23 15:06:50
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小新3858

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by terry130 at 2011-06-23 10:49:04:
考染看到的是所有蛋白，WB检测的是你的目的蛋白，有时候size一样却不是你要的蛋白是很正常的哦。另外你没必要做两张膜，做WB之前或者之后都可以用立春红去染色的，是可逆的，不影响WB效果。

谢谢
以前转膜后没有做过丽春红染色，所以决定再做一次试试
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13楼2011-06-23 15:08:32
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小新3858

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by zhcosa at 2011-06-23 14:19:42:
有没有阳性对照？

转膜后丽春红染一下确定转膜是否成功。再用阳性对照确认一抗、二抗能否正常工作。

谢谢~~
决定再做一次试试呢
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14楼2011-06-23 15:09:10
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grobbie

新虫 (初入文坛)
好好琢磨
说不定有重大发现
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我很想长生不老
15楼2011-07-06 01:17:31
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youcaoke

银虫 (著名写手)
不知道你做western用的什么marker？

推荐用prestained marker，跑完胶就能直接看到marker，直接转膜，转膜后如果膜上marker显示正常，说明转膜成功，接着做后面的封闭，抗体孵育，显色，如果最后显色无条带，那就是抗体效价问题了
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克己制胜
16楼2011-07-06 11:09:40
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小新3858

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by grobbie at 2011-07-06 01:17:31:
好好琢磨
说不定有重大发现


嗯。。。
17楼2011-07-06 12:32:32
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小新3858

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by youcaoke at 2011-07-06 11:09:40:
不知道你做western用的什么marker？

推荐用prestained marker，跑完胶就能直接看到marker，直接转膜，转膜后如果膜上marker显示正常，说明转膜成功，接着做后面的封闭，抗体孵育，显色，如果最后显色无条带，那 ...

谢谢~~
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18楼2011-07-06 12:33:16
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