应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助！！！WB内参、抗体的问题。
71/1返回列表
查看: 3955  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

Hzhenping

新虫 (小有名气)

[求助] 求助！！！WB内参、抗体的问题。 已有1人参与

各位虫友，本人是WB新手。
我们课题组，没有谁做过WB的，之前有一个成员做过，然后就由他请购了试剂，后来他离开了，这个实验就我们自己摸索了。。。但是至今为止我们仍没成功做出内参GAPDH的条带来。目的蛋白条带可以出来，我怀疑是抗体结合不上，我们的一抗是rabbit anti rat的，二抗是goat anti rabbit,内参GAPDH是兔抗小鼠（GAPDH is a mouse monoclonal antibody raised against GAPDH from muscle of rabbit origin）。这样是否会结合不上？请高手指点！如果真结合不上，我该怎么办？
万分感谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-01-07 00:28:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-01-07 08:44:54
Hzhenping: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-01-07 23:39:45
内参二抗用的不对。
GAPDH is a mouse monoclonal antibody raised against GAPDH from muscle of rabbit origin
这句话的意思是做抗体用的抗原GADPH是来自兔子，抗体本身是鼠源的单抗，所以二抗应该选抗鼠的，如山羊抗鼠。
赞一下 回复此楼
2楼2014-01-07 01:03:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Hzhenping

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2014-01-07 01:03:06
内参二抗用的不对。
GAPDH is a mouse monoclonal antibody raised against GAPDH from muscle of rabbit origin
这句话的意思是做抗体用的抗原GADPH是来自兔子，抗体本身是鼠源的单抗，所以二抗应该选抗鼠的，如 ...

谢谢您的回复！
回复此楼
3楼2014-01-07 23:40:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Hzhenping

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2014-01-07 01:03:06
内参二抗用的不对。
GAPDH is a mouse monoclonal antibody raised against GAPDH from muscle of rabbit origin
这句话的意思是做抗体用的抗原GADPH是来自兔子，抗体本身是鼠源的单抗，所以二抗应该选抗鼠的，如 ...

我还想问一下，如果内参和目的蛋白都用相同的二抗可以吗？
赞一下 回复此楼
4楼2014-01-07 23:51:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Hzhenping at 2014-01-07 23:51:54
我还想问一下，如果内参和目的蛋白都用相同的二抗可以吗？...

二抗的选择要根据一抗的来源。你的目的蛋白的一抗不是兔源的吗？你应该用抗兔的二抗。
赞一下 回复此楼
5楼2014-01-08 01:41:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Hzhenping

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2014-01-08 01:41:12
二抗的选择要根据一抗的来源。你的目的蛋白的一抗不是兔源的吗？你应该用抗兔的二抗。...

嗯嗯，谢谢！我们准备换一个内参试试。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
6楼2014-01-09 22:25:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
6楼: Originally posted by Hzhenping at 2014-01-09 22:25:31
嗯嗯，谢谢！我们准备换一个内参试试。
...

其实二抗不同也没有什么。可以用检测过目的蛋白的膜直接孵育内参的一抗。因为二抗不同而不会有交叉反应。
赞一下 回复此楼
7楼2014-01-10 01:56:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Hzhenping 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化学调剂0703 +8 啊我我的 2026-03-11 8/400 2026-03-16 17:23 by 我的船我的海
[考研] 一志愿985，本科211，0817化学工程与技术319求调剂 +5 Liwangman 2026-03-15 5/250 2026-03-16 17:10 by 我的船我的海
[考研] 0703化学336分求调剂 +3 zbzihdhd 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:44 by 我的船我的海
[考研] 085601材料工程315分求调剂 +3 yang_0104 2026-03-15 3/150 2026-03-15 10:58 by peike
[考研] 本科南京大学一志愿川大药学327 +3 麦田耕者 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:04 by 外星文明
[考研] 【0703化学调剂】-一志愿华中师范大学-六级475 +5 Becho359 2026-03-11 5/250 2026-03-14 11:35 by 哦哦123
[考研] 265求调剂 +9 小木虫085600 2026-03-09 12/600 2026-03-14 01:11 by JourneyLucky
[考研] 求材料调剂 +5 隔壁陈先生 2026-03-12 5/250 2026-03-13 22:03 by 星空星月
[考研] 315求调剂 +9 小羊小羊_ 2026-03-11 10/500 2026-03-13 21:13 by SXNU李老师
[考研] 281求调剂 +9 Koxui 2026-03-12 11/550 2026-03-13 20:50 by Koxui
[硕博家园] 085600 260分求调剂 +3 天空还下雨么 2026-03-13 5/250 2026-03-13 18:46 by 天空还下雨么
[考研] 工科278分求调剂 +5 周慢热啊 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:49 by JourneyLucky
[考研] 290求调剂 +7 ADT 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:17 by JourneyLucky
[考研] 328化工专硕求调剂 +4 。，。，。，。i 2026-03-12 4/200 2026-03-13 14:44 by JourneyLucky
[考研] 296求调剂 +3 大口吃饭 身体健 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:31 by 学员8dgXkO
[考研] 290求调剂 +3 ADT 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:19 by peike
[考研] 化工学硕306求调剂 +9 42838695 2026-03-12 9/450 2026-03-13 10:16 by houyaoxu
[考研] 321求调剂（食品/专硕） +3 xc321 2026-03-12 6/300 2026-03-13 08:45 by xc321
[考研] 420求调剂 +4 莫向外求11 2026-03-10 6/300 2026-03-12 14:41 by ruiyingmiao
[考博] 读博申请 +5 感dd 2026-03-10 7/350 2026-03-11 17:02 by QGZDSYS
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭