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请教有关Westen Blot抗体有关的问题
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最近在做蛋白质印迹，要买抗体，什么都不懂，急需各位大神的交流指导。 我们做的是从人细胞中提取出来的蛋白，现在主要存在两个问题： 1 哪家的抗体质量好、价格比较优惠，多数做蛋白的都选择的品牌 2 一抗有很多不同的种属来源，我应该选择同源的，比如我检测的是人细胞蛋白，就选人源的，或者异源的，比如我师兄买的就是兔源的，这个有什么选择标准吗？ 本人现在已经研三了，急着做完蛋白这块要毕业了，跪求指导呀！！！ |
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1.抗体的选择可以上NCBI检索Protein中你的目的蛋白，右侧有一个抗体的链接（连到http://www.labome.com）上面有该抗体哪些公司有。Abcam不错，但贵。Santa Cruz种类多，浓度低，便宜，但质量波动大。Cell Signaling Technology(CST)质量不错，信号传导和磷酸化抗体是强项。sigma可以提供小包装的，内参抗体不错，价格也可以。关键是不同的抗原各公司的抗体不一定有。我做线虫的抗体就很难找，有的只有一家公司有。 2.抗体种属。一般由于哺乳动物蛋白同源性高，一般的抗体会适用于人，大鼠，小鼠。具体的蛋白针对的种属要查抗体说明书（在各公司网站查）。要注意抗原表位的序列尤其是可能突变的位置。只要标明可用于人均可。查找时可以参考高水平文献用过的抗体。 3.如果没有其他要求，选种属范围大的，可以使实验室其他人或其他实验组都受益。习惯和周围的人交换抗体可以节约成本，而且节约摸条件的时间。帮别人带样或互为对照，有时也挺好的（摸条件且样品不多时）。 4.选好匹配的二抗。 5.最有用的抗体资料是各公司相应的说明书，多读细读。和周围wb的多交流。 |
9楼2013-09-27 10:17:20
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你的蛋白是人的细胞的，那你的一抗就只要能识别人的细胞蛋白就行了，不管一抗是否异源，只是你选择二抗的时候不同而已。如果你的一抗选择的是小鼠来源抗体，你的二抗就要用抗小鼠的；如果你的一抗是选择的兔子来源的，那你的二抗就要用抗兔的。我有鼠单抗Anti-NFkB p65、Anti-NFkB p105 / p50以及兔多抗Anti-p38 MAPK，暂时还没有Anti-RAGE的抗体，鼠单抗Anti-NFkB p65、Anti-NFkB p105 / p50都能识别人细胞裂解液。如果有需要或者其他不懂的地方都可以联系我。 |
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14楼2013-10-16 20:58:50
cicelyzh
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