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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请教有关Westen Blot抗体有关的问题
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民爱桥

铜虫 (小有名气)

[求助] 请教有关Westen Blot抗体有关的问题

最近在做蛋白质印迹，要买抗体，什么都不懂，急需各位大神的交流指导。
我们做的是从人细胞中提取出来的蛋白，现在主要存在两个问题：
1 哪家的抗体质量好、价格比较优惠，多数做蛋白的都选择的品牌
2 一抗有很多不同的种属来源，我应该选择同源的，比如我检测的是人细胞蛋白，就选人源的，或者异源的，比如我师兄买的就是兔源的，这个有什么选择标准吗？
本人现在已经研三了，急着做完蛋白这块要毕业了，跪求指导呀！！！
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1楼 2013-09-26 16:21:02
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回帖置顶 ( 共有1个 )

hl16010921

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
民爱桥: 金币+10, ★有帮助 2013-09-27 10:59:46
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-27 17:10:43
gyesang: 回帖置顶 2013-09-27 17:10:48
1.抗体的选择可以上NCBI检索Protein中你的目的蛋白，右侧有一个抗体的链接（连到http://www.labome.com）上面有该抗体哪些公司有。Abcam不错，但贵。Santa Cruz种类多，浓度低，便宜，但质量波动大。Cell Signaling Technology(CST)质量不错，信号传导和磷酸化抗体是强项。sigma可以提供小包装的，内参抗体不错，价格也可以。关键是不同的抗原各公司的抗体不一定有。我做线虫的抗体就很难找，有的只有一家公司有。
2.抗体种属。一般由于哺乳动物蛋白同源性高，一般的抗体会适用于人，大鼠，小鼠。具体的蛋白针对的种属要查抗体说明书（在各公司网站查）。要注意抗原表位的序列尤其是可能突变的位置。只要标明可用于人均可。查找时可以参考高水平文献用过的抗体。
3.如果没有其他要求，选种属范围大的，可以使实验室其他人或其他实验组都受益。习惯和周围的人交换抗体可以节约成本，而且节约摸条件的时间。帮别人带样或互为对照，有时也挺好的（摸条件且样品不多时）。
4.选好匹配的二抗。
5.最有用的抗体资料是各公司相应的说明书，多读细读。和周围wb的多交流。
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9楼2013-09-27 10:17:20
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0624410024

金虫 (正式写手)

Begging for knowledge
★ ★ ★
gyesang: 金币+3, 非常热心！ 2013-10-25 13:24:08
引用回帖:
13楼: Originally posted by 民爱桥 at 2013-10-15 14:27:53
NF-KB（p65、p50）、RAGE、p38MAPK,总共四个...

你的蛋白是人的细胞的，那你的一抗就只要能识别人的细胞蛋白就行了，不管一抗是否异源，只是你选择二抗的时候不同而已。如果你的一抗选择的是小鼠来源抗体，你的二抗就要用抗小鼠的；如果你的一抗是选择的兔子来源的，那你的二抗就要用抗兔的。我有鼠单抗Anti-NFkB p65、Anti-NFkB p105 / p50以及兔多抗Anti-p38 MAPK，暂时还没有Anti-RAGE的抗体，鼠单抗Anti-NFkB p65、Anti-NFkB p105 / p50都能识别人细胞裂解液。如果有需要或者其他不懂的地方都可以联系我。
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民爱桥
每天坚持多一点，以后困难少一点！
14楼2013-10-16 20:58:50
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普通回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
民爱桥: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-09-27 09:33:28
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-09-27 10:13:22
一般商业化的抗体都比较好，大一点的公司质量更有保证一些。主要是有你要买的抗体就行。至于抗体种属来源，一般而言，同源的可能会比较好，异源有时候也可以用的，主要看你做的蛋白的保守性和抗体制作的方法。如果你做的是人源蛋白，如果有人源相应抗体卖就买人源的。
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民爱桥
2楼2013-09-27 01:58:35
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lvshilu

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
民爱桥: 金币+5, ★有帮助 2013-09-27 09:33:44
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-09-27 10:13:26
Abcam公司
是世界有名的抗体王国，以优质、齐全的产品、完善的网络支持功能和强大的技术支持队伍得到全球客户的认可和赞誉。并在2004年获得了对于生物界公司不可多得的英女王奖，拥有很好的知名度和口碑。

如果你做的不是什么通路研究，一抗的选择上种属没有限制，只要亲和力和，WB效果好就行了。没问题。
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民爱桥
需要金币
3楼2013-09-27 08:41:23
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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
民爱桥: 金币+5, ★有帮助 2013-09-27 09:33:56
earthox的抗体挺不错的，也是国外的，名字不出名，但价格实惠，我也用过
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民爱桥
我会绕一个圈，走回到实验室
4楼2013-09-27 09:13:20
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民爱桥

铜虫 (小有名气)
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引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-09-27 01:58:35
一般商业化的抗体都比较好，大一点的公司质量更有保证一些。主要是有你要买的抗体就行。至于抗体种属来源，一般而言，同源的可能会比较好，异源有时候也可以用的，主要看你做的蛋白的保守性和抗体制作的方法。如果你 ...

5楼2013-09-27 09:21:07
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民爱桥

铜虫 (小有名气)
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引用回帖:
4楼: Originally posted by loveskyzhou at 2013-09-27 09:13:20
earthox的抗体挺不错的，也是国外的，名字不出名，但价格实惠，我也用过

6楼2013-09-27 09:21:27
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民爱桥

铜虫 (小有名气)
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引用回帖:
3楼: Originally posted by lvshilu at 2013-09-27 08:41:23
Abcam公司
是世界有名的抗体王国，以优质、齐全的产品、完善的网络支持功能和强大的技术支持队伍得到全球客户的认可和赞誉。并在2004年获得了对于生物界公司不可多得的英女王奖，拥有很好的知名度和口碑。

如果 ...

7楼2013-09-27 09:21:41
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民爱桥

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-09-27 01:58:35
一般商业化的抗体都比较好，大一点的公司质量更有保证一些。主要是有你要买的抗体就行。至于抗体种属来源，一般而言，同源的可能会比较好，异源有时候也可以用的，主要看你做的蛋白的保守性和抗体制作的方法。如果你 ...

请问如果我的一抗是单克隆抗体，那我的二抗要选择配套的二抗，还是普通的相同物种来源的就好？
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8楼2013-09-27 09:30:46
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hl16010921

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-28 02:00:10
民爱桥: 金币+5, ★有帮助 2013-09-28 09:58:51
引用回帖:
8楼: Originally posted by 民爱桥 at 2013-09-27 09:30:46
请问如果我的一抗是单克隆抗体，那我的二抗要选择配套的二抗，还是普通的相同物种来源的就好？...

不可以是同种来源的，同种来源的无法识别，没有小鼠抗小鼠的抗体。二抗要抗一抗的，例如检测人的蛋白a，一抗是小鼠的单抗（可以识别a，人的，大鼠的，狗的），二抗要选，兔抗小鼠，山羊抗小鼠，鸡抗小鼠甚至大鼠抗小鼠。
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10楼2013-09-27 16:06:40
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