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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请教有关Westen Blot抗体有关的问题
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
民爱桥: 金币+5, ★有帮助 2013-09-28 09:58:15
民爱桥: 金币+5, ★有帮助 2013-09-29 10:29:38
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-10-25 13:24:38
引用回帖:
8楼: Originally posted by 民爱桥 at 2013-09-27 09:30:46
请问如果我的一抗是单克隆抗体，那我的二抗要选择配套的二抗，还是普通的相同物种来源的就好？...

二抗是识别一抗的，需要选择其它来源制备的抗一抗免疫球蛋白的。如果一抗是鼠来源，就要选择抗鼠的二抗，可以是兔抗鼠、羊抗鼠或者其它的。
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11楼2013-09-27 23:00:52
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0624410024

金虫 (正式写手)

Begging for knowledge

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
民爱桥: 金币+5 2013-10-15 14:28:02
不知道楼主是做什么蛋白的WB，不知道可以讲否，看我能不能帮助您。
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每天坚持多一点，以后困难少一点！
12楼2013-10-12 09:01:53
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民爱桥

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 0624410024 at 2013-10-12 09:01:53
不知道楼主是做什么蛋白的WB，不知道可以讲否，看我能不能帮助您。

NF-KB（p65、p50）、RAGE、p38MAPK,总共四个
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13楼2013-10-15 14:27:53
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0624410024

金虫 (正式写手)

Begging for knowledge
★ ★ ★
gyesang: 金币+3, 非常热心！ 2013-10-25 13:24:08
引用回帖:
13楼: Originally posted by 民爱桥 at 2013-10-15 14:27:53
NF-KB（p65、p50）、RAGE、p38MAPK,总共四个...

你的蛋白是人的细胞的，那你的一抗就只要能识别人的细胞蛋白就行了，不管一抗是否异源，只是你选择二抗的时候不同而已。如果你的一抗选择的是小鼠来源抗体，你的二抗就要用抗小鼠的；如果你的一抗是选择的兔子来源的，那你的二抗就要用抗兔的。我有鼠单抗Anti-NFkB p65、Anti-NFkB p105 / p50以及兔多抗Anti-p38 MAPK，暂时还没有Anti-RAGE的抗体，鼠单抗Anti-NFkB p65、Anti-NFkB p105 / p50都能识别人细胞裂解液。如果有需要或者其他不懂的地方都可以联系我。
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民爱桥
每天坚持多一点，以后困难少一点！
14楼2013-10-16 20:58:50
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民爱桥

铜虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
14楼: Originally posted by 0624410024 at 2013-10-16 20:58:50
你的蛋白是人的细胞的，那你的一抗就只要能识别人的细胞蛋白就行了，不管一抗是否异源，只是你选择二抗的时候不同而已。如果你的一抗选择的是小鼠来源抗体，你的二抗就要用抗小鼠的；如果你的一抗是选择的兔子来源 ...

谢谢，这个抗体的问题我基本上是搞明白了，还有些别的问题想请教您。
1你们做p65、p50，也是提的细胞核的蛋白吗？我每次提出来的蛋白浓度都很低，已经是按照2*105个/ml的密度铺板了，6个孔一组，提出来的蛋白浓度最多也就5μg/μl的样子。这还算好的，我做RAGE的时候，是提膜蛋白，那浓度甚至都只有1μg/μl，因为浓度太低都没法做后面的。想请教一下您那边是怎么做的，像这种能不能直接提总蛋白来做呢？
2我做了好几次，结果的背景很深，有时能看到条带但背景有些花，有时甚至看不到条带，一片都是黑的，转膜以前的操作应该都是没有问题的，封闭、洗膜这些我也都有注意，封闭用的脱脂奶粉2h，洗膜5min*5次，不知道是什么原因每次做出来的结果都不好，您能给指导一下不，嘿嘿?谢谢您了
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15楼2013-10-17 09:00:04
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0624410024

金虫 (正式写手)

Begging for knowledge

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
民爱桥: 金币+20, ★★★很有帮助 2013-10-17 14:00:37
gyesang: 金币+5, 鼓励交流！ 2013-10-25 13:25:34
内容已删除
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16楼2013-10-17 12:34:06
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xiwenhui

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
民爱桥: 金币+1 2013-10-25 11:34:48
你实验做得怎么样了？？需不需要指导哈或者代理？？
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17楼2013-10-25 10:58:01
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