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[求助]
请教有关Westen Blot抗体有关的问题
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最近在做蛋白质印迹，要买抗体，什么都不懂，急需各位大神的交流指导。 我们做的是从人细胞中提取出来的蛋白，现在主要存在两个问题： 1 哪家的抗体质量好、价格比较优惠，多数做蛋白的都选择的品牌 2 一抗有很多不同的种属来源，我应该选择同源的，比如我检测的是人细胞蛋白，就选人源的，或者异源的，比如我师兄买的就是兔源的，这个有什么选择标准吗？ 本人现在已经研三了，急着做完蛋白这块要毕业了，跪求指导呀！！！ |
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送红花一朵 |
谢谢，这个抗体的问题我基本上是搞明白了，还有些别的问题想请教您。 1你们做p65、p50，也是提的细胞核的蛋白吗？我每次提出来的蛋白浓度都很低，已经是按照2*105个/ml的密度铺板了，6个孔一组，提出来的蛋白浓度最多也就5μg/μl的样子。这还算好的，我做RAGE的时候，是提膜蛋白，那浓度甚至都只有1μg/μl，因为浓度太低都没法做后面的。想请教一下您那边是怎么做的，像这种能不能直接提总蛋白来做呢？ 2我做了好几次，结果的背景很深，有时能看到条带但背景有些花，有时甚至看不到条带，一片都是黑的，转膜以前的操作应该都是没有问题的，封闭、洗膜这些我也都有注意，封闭用的脱脂奶粉2h，洗膜5min*5次，不知道是什么原因每次做出来的结果都不好，您能给指导一下不，嘿嘿?谢谢您了 |
15楼2013-10-17 09:00:04
cicelyzh
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2楼2013-09-27 01:58:35
3楼2013-09-27 08:41:23
loveskyzhou
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4楼2013-09-27 09:13:20