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民爱桥

铜虫 (小有名气)

[求助] 请教有关Westen Blot抗体有关的问题

最近在做蛋白质印迹,要买抗体,什么都不懂,急需各位大神的交流指导。
我们做的是从人细胞中提取出来的蛋白,现在主要存在两个问题:
1 哪家的抗体质量好、价格比较优惠,多数做蛋白的都选择的品牌
2 一抗有很多不同的种属来源,我应该选择同源的,比如我检测的是人细胞蛋白,就选人源的,或者异源的,比如我师兄买的就是兔源的,这个有什么选择标准吗?
本人现在已经研三了,急着做完蛋白这块要毕业了,跪求指导呀!!!
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民爱桥

铜虫 (小有名气)

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引用回帖:
14楼: Originally posted by 0624410024 at 2013-10-16 20:58:50
你的蛋白是人的细胞的,那你的一抗就只要能识别人的细胞蛋白就行了,不管一抗是否异源,只是你选择二抗的时候不同而已。如果你的一抗选择的是小鼠来源抗体,你的二抗就要用抗小鼠的;如果你的一抗是选择的兔子来源 ...

谢谢,这个抗体的问题我基本上是搞明白了,还有些别的问题想请教您。
1你们做p65、p50,也是提的细胞核的蛋白吗?我每次提出来的蛋白浓度都很低,已经是按照2*105个/ml的密度铺板了,6个孔一组,提出来的蛋白浓度最多也就5μg/μl的样子。这还算好的,我做RAGE的时候,是提膜蛋白,那浓度甚至都只有1μg/μl,因为浓度太低都没法做后面的。想请教一下您那边是怎么做的,像这种能不能直接提总蛋白来做呢?
2我做了好几次,结果的背景很深,有时能看到条带但背景有些花,有时甚至看不到条带,一片都是黑的,转膜以前的操作应该都是没有问题的,封闭、洗膜这些我也都有注意,封闭用的脱脂奶粉2h,洗膜5min*5次,不知道是什么原因每次做出来的结果都不好,您能给指导一下不,嘿嘿?谢谢您了
15楼2013-10-17 09:00:04
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
民爱桥: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-09-27 09:33:28
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-09-27 10:13:22
一般商业化的抗体都比较好,大一点的公司质量更有保证一些。主要是有你要买的抗体就行。至于抗体种属来源,一般而言,同源的可能会比较好,异源有时候也可以用的,主要看你做的蛋白的保守性和抗体制作的方法。如果你做的是人源蛋白,如果有人源相应抗体卖就买人源的。

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2楼2013-09-27 01:58:35
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lvshilu

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
民爱桥: 金币+5, 有帮助 2013-09-27 09:33:44
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-09-27 10:13:26
Abcam公司
是世界有名的抗体王国,以优质、齐全的产品、完善的网络支持功能和强大的技术支持队伍得到全球客户的认可和赞誉。并在2004年获得了对于生物界公司不可多得的英女王奖,拥有很好的知名度和口碑。

如果你做的不是什么通路研究,一抗的选择上种属没有限制,只要亲和力和,WB效果好就行了。没问题。

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需要金币
3楼2013-09-27 08:41:23
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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
民爱桥: 金币+5, 有帮助 2013-09-27 09:33:56
earthox的抗体挺不错的,也是国外的,名字不出名,但价格实惠,我也用过

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我会绕一个圈,走回到实验室
4楼2013-09-27 09:13:20
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