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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » western blot 显色时，膜的中间有一小块空白区域，是怎么回事？
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linsui1989

新虫 (小有名气)

[求助] western blot 显色时，膜的中间有一小块空白区域，是怎么回事？

我在显色时膜的其他地方都有蓝色背景，唯独中间有一圆形区域是白色，不管怎么加显色液都不行，没有背景，也没有特异性反应条带， 请问是什么问题？以前做的时候不这样的
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1楼 2013-01-23 19:30:19
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匿名

用户注销 (小有名气)
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3楼2013-01-24 10:01:09
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可能是抗体或者显色液孵育不均匀。你孵育时用的是什么样的shaker?
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2楼2013-01-24 07:58:42
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linsui1989

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by qitianyang at 2013-01-24 10:01:09
那个应该是在做转膜三明治（滤纸-膜-胶-滤纸）的时候不小心有气泡夹在中间了，气泡会阻止蛋白转到膜上，你显色的时候自然一块白，什么都没有了。

可是哪片空白的直径都一公分多了，怎么可能会有那么大的气泡我却看不到呢？
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4楼2013-01-24 12:45:43
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linsui1989

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-24 07:58:42
可能是抗体或者显色液孵育不均匀。你孵育时用的是什么样的shaker?

我没有震荡，用了个小平皿，一抗4度过夜或者37度一小时
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5楼2013-01-24 12:48:29
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
5楼: Originally posted by linsui1989 at 2013-01-24 12:48:29
我没有震荡，用了个小平皿，一抗4度过夜或者37度一小时...

一般是用一个上下摇摆摇床缓慢摇动，使抗体能均匀附着。用旋转摇床的话容易在中间形成你说的空白。没有试过静置的。
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6楼2013-01-24 13:16:57
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匿名

用户注销 (小有名气)
★
linsui1989: 金币+1, ★有帮助 2013-01-24 18:32:48
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7楼2013-01-24 13:38:34
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linsui1989

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by qitianyang at 2013-01-24 13:38:34
旋转摇床和水平摇床我们都用过，即使旋转摇床也没出现过膜上有白斑的情况。4度过夜只要抗体盖过膜也不会孵育不上的啊。感觉还是转膜的过程的问题。...

谢谢，可能是平皿不平吧，我再多加点液体试试
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8楼2013-01-24 18:33:19
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linsui1989

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-24 13:16:57
一般是用一个上下摇摆摇床缓慢摇动，使抗体能均匀附着。用旋转摇床的话容易在中间形成你说的空白。没有试过静置的。...

谢谢
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9楼2013-01-24 18:33:31
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jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你粘在什么地方了吧？要不应该不会有空白的
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10楼2013-01-25 09:36:26
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