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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » western-blotting 为什么老是不能显色？
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hwandy87

银虫 (小有名气)

[交流] western-blotting 为什么老是不能显色？

蛋白质重组表达时，跑SDS-PAGE感觉有目的条带，但做Western-blotting时却没有条带，有时候能隐约的看到一些很不清晰的带...是怎么回事啊？

PS：W-B时，预染Maker会出现跑花，是怎么回事啊？
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1楼 2011-12-08 12:59:31
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linyingjia

至尊木虫 (职业作家)
★
hwandy87(金币+1):谢谢参与
是抗体的问题还是ecl的问题啊     你们的抗体是哪家的啊    怎么实用的 呢
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5楼2011-12-08 16:56:51
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zplipeng

金虫 (著名写手)
★
hwandy87(金币+1):谢谢参与
建议上图交流。
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6楼2011-12-09 08:24:40
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yang0071

木虫 (职业作家)
★
hwandy87(金币+1):谢谢参与
上图，看图说话
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7楼2011-12-09 10:23:43
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maothree54

至尊木虫 (知名作家)
★
hwandy87(金币+1):谢谢参与
有可能是你转膜的时候出现差错，没有转上去；
还有可能是你的发光底物有问题：太灵敏，很容易淬灭！
总之，原因是很多的，楼主要重复实验，试着去逐个排除上述可能的原因！
祝你顺利！
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8楼2011-12-09 11:31:23
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yayashuai

木虫 (正式写手)
★
hwandy87(金币+1):谢谢参与
小朋友，，，你做实验不认真了吧...
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9楼2011-12-09 12:31:04
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peng5053

银虫 (正式写手)
★
hwandy87(金币+1):谢谢参与
预染Marker跑花是你转膜的问题。
SDS-PAGE感觉有条带？你是怎么感觉的？
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10楼2011-12-09 15:51:39
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hwandy87

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by hwandy87 at 2011-12-08 14:29:31:
[ Last edited by linyingjia on 2011-12-8 at 16:56 ]

抗体是南京金丝瑞公司的...现在用的是DAB染色，效果不行...想换ECL试一试...
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11楼2011-12-19 12:45:45
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hwandy87

银虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by peng5053 at 2011-12-09 15:51:39:
预染Marker跑花是你转膜的问题。
SDS-PAGE感觉有条带？你是怎么感觉的？

不同诱导时间的样品，能明显感觉到又到时间越长，条带越深...
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12楼2011-12-19 12:47:48
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zplipeng

金虫 (著名写手)
有图才由真相
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13楼2011-12-19 20:21:55
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chongjian

木虫 (正式写手)
★
hwandy87(金币+1):谢谢参与
你可以把胶先做一个银染，看有没有你的目的带，然后再重做一次western，预染Marker跑花原因：1是你点样跑胶引起，不要点样太靠边，2是转膜引起
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14楼2012-01-07 09:47:11
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hwandy872楼
2011-12-08 14:29   回复  
linyingjia:编辑内容 2011-12-08 16:55
[ Last edited by linyingjia on 2011-12-8 at 16:55 ]
hwandy873楼
2011-12-08 14:29   回复  
linyingjia:编辑内容 2011-12-08 16:55
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hwandy874楼
2011-12-08 14:29   回复  
linyingjia:编辑内容 2011-12-08 16:56
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