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蹦跶的奶牛

新虫 (初入文坛)

[求助] western blot 转膜切胶后胶变弯曲变长是什么原因?

求助!!我在做western转膜的时候想把胶切一下,结果胶切两下了后有两条较窄的胶就变弯变长了,我做三明治放膜都不能将其完全覆盖,到底是什么原因?不知道是不是胶切得太细了?以前做的时候没有出现过这种情况,就是这两回做就这样了,很奇怪。
还有转膜后有一个膜没有marker 而且还干掉了。我转膜时间90分钟,300mA。是什么原因?蛋白是不是就测不出来了?希望各位高手帮忙解答一下~
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2011加油

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-11-28 13:45:21
胶比较干时,会变卷,但不会变长啊,再用点电转液润一润,再做三明治。没有marker,你可以看看印到下面滤纸没?有没有转过了。也可以将胶进行考染,看看有没有蛋白条带残留没转过去。可以试着做完后续实验,看看结果再说吧
每天都是新开始,2011,要好好努力!
2楼2012-11-27 19:22:32
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小小技术官

木虫 (正式写手)

感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 应助指数-1 2012-11-28 13:45:30
蹦跶的奶牛~~ 再让你蹦跶 实验不好做了吧
生活是一面镜子,要笑着面对!
3楼2012-11-27 23:24:41
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lishg1985

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这种情况下,你可以转完膜后用丽春红染色,然后再参照分子量剪膜,这样就可以达到你想要的结果,祝实验顺利~
4楼2012-11-28 08:25:51
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
胶稍微变大一点是正常的,因为转膜用的buffer和胶的buffer是不一样的。一般可以把膜弄的稍稍大一点就不会出现转丢的问题啦。
5楼2012-11-28 08:27:56
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蹦跶的奶牛

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 2011加油 at 2012-11-27 19:22:32
胶比较干时,会变卷,但不会变长啊,再用点电转液润一润,再做三明治。没有marker,你可以看看印到下面滤纸没?有没有转过了。也可以将胶进行考染,看看有没有蛋白条带残留没转过去。可以试着做完后续实验,看看结果 ...

谢谢。不过没有印到下面的滤纸,只是膜变干了。今天孵了抗体,果然什么都没有。。。又重做了,不知道明天结果怎么样呢。
6楼2012-11-28 14:28:56
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蹦跶的奶牛

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-28 08:27:56
胶稍微变大一点是正常的,因为转膜用的buffer和胶的buffer是不一样的。一般可以把膜弄的稍稍大一点就不会出现转丢的问题啦。

每次也都要大一些。可能我切的胶实在太小太细了,放滤纸赶气泡的时候膜和胶就错位了。
7楼2012-11-28 14:30:09
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蹦跶的奶牛

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by lishg1985 at 2012-11-28 08:25:51
这种情况下,你可以转完膜后用丽春红染色,然后再参照分子量剪膜,这样就可以达到你想要的结果,祝实验顺利~

意思是说我可以先整片胶转膜再裁开就好了吗?
8楼2012-11-28 14:31:31
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2011加油

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 蹦跶的奶牛 at 2012-11-28 14:28:56
谢谢。不过没有印到下面的滤纸,只是膜变干了。今天孵了抗体,果然什么都没有。。。又重做了,不知道明天结果怎么样呢。...

PVDF膜最好不能干,还是多注意转膜,排除一些影响,再试试,好运!
每天都是新开始,2011,要好好努力!
9楼2012-11-28 17:32:31
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aprils1988

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我觉得是要把胶和pvdf膜都放在转膜液里平衡一下,我也是经常切完胶发现胶变卷了,有点不平,有一边会伸长
10楼2013-07-29 20:37:33
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