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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » western blot 转膜切胶后胶变弯曲变长是什么原因？
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蹦跶的奶牛

新虫 (初入文坛)

[求助] western blot 转膜切胶后胶变弯曲变长是什么原因？

求助！！我在做western转膜的时候想把胶切一下，结果胶切两下了后有两条较窄的胶就变弯变长了，我做三明治放膜都不能将其完全覆盖，到底是什么原因？不知道是不是胶切得太细了？以前做的时候没有出现过这种情况，就是这两回做就这样了，很奇怪。
还有转膜后有一个膜没有marker 而且还干掉了。我转膜时间90分钟，300mA。是什么原因？蛋白是不是就测不出来了？希望各位高手帮忙解答一下~
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1楼 2012-11-27 17:25:07
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2011加油

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-11-28 13:45:21
胶比较干时，会变卷，但不会变长啊，再用点电转液润一润，再做三明治。没有marker，你可以看看印到下面滤纸没？有没有转过了。也可以将胶进行考染，看看有没有蛋白条带残留没转过去。可以试着做完后续实验，看看结果再说吧
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每天都是新开始，2011，要好好努力！
2楼2012-11-27 19:22:32
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小小技术官

木虫 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 应助指数-1 2012-11-28 13:45:30
蹦跶的奶牛~~ 再让你蹦跶 实验不好做了吧
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生活是一面镜子，要笑着面对！
3楼2012-11-27 23:24:41
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lishg1985

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这种情况下，你可以转完膜后用丽春红染色，然后再参照分子量剪膜，这样就可以达到你想要的结果，祝实验顺利~
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4楼2012-11-28 08:25:51
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
胶稍微变大一点是正常的，因为转膜用的buffer和胶的buffer是不一样的。一般可以把膜弄的稍稍大一点就不会出现转丢的问题啦。
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5楼2012-11-28 08:27:56
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蹦跶的奶牛

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 2011加油 at 2012-11-27 19:22:32
胶比较干时，会变卷，但不会变长啊，再用点电转液润一润，再做三明治。没有marker，你可以看看印到下面滤纸没？有没有转过了。也可以将胶进行考染，看看有没有蛋白条带残留没转过去。可以试着做完后续实验，看看结果 ...

谢谢。不过没有印到下面的滤纸，只是膜变干了。今天孵了抗体，果然什么都没有。。。又重做了，不知道明天结果怎么样呢。
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6楼2012-11-28 14:28:56
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蹦跶的奶牛

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-28 08:27:56
胶稍微变大一点是正常的，因为转膜用的buffer和胶的buffer是不一样的。一般可以把膜弄的稍稍大一点就不会出现转丢的问题啦。

每次也都要大一些。可能我切的胶实在太小太细了，放滤纸赶气泡的时候膜和胶就错位了。
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7楼2012-11-28 14:30:09
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蹦跶的奶牛

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lishg1985 at 2012-11-28 08:25:51
这种情况下，你可以转完膜后用丽春红染色，然后再参照分子量剪膜，这样就可以达到你想要的结果，祝实验顺利~

意思是说我可以先整片胶转膜再裁开就好了吗？
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8楼2012-11-28 14:31:31
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2011加油

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 蹦跶的奶牛 at 2012-11-28 14:28:56
谢谢。不过没有印到下面的滤纸，只是膜变干了。今天孵了抗体，果然什么都没有。。。又重做了，不知道明天结果怎么样呢。...

PVDF膜最好不能干，还是多注意转膜，排除一些影响，再试试，好运！
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每天都是新开始，2011，要好好努力！
9楼2012-11-28 17:32:31
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aprils1988

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我觉得是要把胶和pvdf膜都放在转膜液里平衡一下，我也是经常切完胶发现胶变卷了，有点不平，有一边会伸长
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10楼2013-07-29 20:37:33
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