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linsui1989

新虫 (小有名气)

[求助] western blot 显色时,膜的中间有一小块空白区域,是怎么回事?

我在显色时膜的其他地方都有蓝色背景,唯独中间有一圆形区域是白色,不管怎么加显色液都不行,没有背景,也没有特异性反应条带, 请问是什么问题?以前做的时候不这样的
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匿名

用户注销 (小有名气)

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3楼2013-01-24 10:01:09
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

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可能是抗体或者显色液孵育不均匀。你孵育时用的是什么样的shaker?
2楼2013-01-24 07:58:42
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linsui1989

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by qitianyang at 2013-01-24 10:01:09
那个应该是在做转膜三明治(滤纸-膜-胶-滤纸)的时候不小心有气泡夹在中间了,气泡会阻止蛋白转到膜上,你显色的时候自然一块白,什么都没有了。

可是哪片空白的直径都一公分多了,怎么可能会有那么大的气泡我却看不到呢?
4楼2013-01-24 12:45:43
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linsui1989

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-24 07:58:42
可能是抗体或者显色液孵育不均匀。你孵育时用的是什么样的shaker?

我没有震荡,用了个小平皿,一抗4度过夜或者37度一小时
5楼2013-01-24 12:48:29
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