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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助！！！WB内参、抗体的问题。
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Hzhenping

新虫 (小有名气)

[求助] 求助！！！WB内参、抗体的问题。 已有1人参与

各位虫友，本人是WB新手。
我们课题组，没有谁做过WB的，之前有一个成员做过，然后就由他请购了试剂，后来他离开了，这个实验就我们自己摸索了。。。但是至今为止我们仍没成功做出内参GAPDH的条带来。目的蛋白条带可以出来，我怀疑是抗体结合不上，我们的一抗是rabbit anti rat的，二抗是goat anti rabbit,内参GAPDH是兔抗小鼠（GAPDH is a mouse monoclonal antibody raised against GAPDH from muscle of rabbit origin）。这样是否会结合不上？请高手指点！如果真结合不上，我该怎么办？
万分感谢！
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1楼 2014-01-07 00:28:04
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-01-07 08:44:54
Hzhenping: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-01-07 23:39:45
内参二抗用的不对。
GAPDH is a mouse monoclonal antibody raised against GAPDH from muscle of rabbit origin
这句话的意思是做抗体用的抗原GADPH是来自兔子，抗体本身是鼠源的单抗，所以二抗应该选抗鼠的，如山羊抗鼠。
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2楼2014-01-07 01:03:06
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Hzhenping

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2014-01-07 01:03:06
内参二抗用的不对。
GAPDH is a mouse monoclonal antibody raised against GAPDH from muscle of rabbit origin
这句话的意思是做抗体用的抗原GADPH是来自兔子，抗体本身是鼠源的单抗，所以二抗应该选抗鼠的，如 ...

谢谢您的回复！
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3楼2014-01-07 23:40:15
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Hzhenping

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2014-01-07 01:03:06
内参二抗用的不对。
GAPDH is a mouse monoclonal antibody raised against GAPDH from muscle of rabbit origin
这句话的意思是做抗体用的抗原GADPH是来自兔子，抗体本身是鼠源的单抗，所以二抗应该选抗鼠的，如 ...

我还想问一下，如果内参和目的蛋白都用相同的二抗可以吗？
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4楼2014-01-07 23:51:54
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Hzhenping at 2014-01-07 23:51:54
我还想问一下，如果内参和目的蛋白都用相同的二抗可以吗？...

二抗的选择要根据一抗的来源。你的目的蛋白的一抗不是兔源的吗？你应该用抗兔的二抗。
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5楼2014-01-08 01:41:12
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Hzhenping

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2014-01-08 01:41:12
二抗的选择要根据一抗的来源。你的目的蛋白的一抗不是兔源的吗？你应该用抗兔的二抗。...

嗯嗯，谢谢！我们准备换一个内参试试。

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6楼2014-01-09 22:25:31
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
6楼: Originally posted by Hzhenping at 2014-01-09 22:25:31
嗯嗯，谢谢！我们准备换一个内参试试。
...

其实二抗不同也没有什么。可以用检测过目的蛋白的膜直接孵育内参的一抗。因为二抗不同而不会有交叉反应。
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7楼2014-01-10 01:56:43
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