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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » WB三明治--滤纸大小问题
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gigiloveu

铜虫 (小有名气)

[求助] WB三明治--滤纸大小问题

三明治中，有人说胶和膜两边的滤纸不能挨到，否则即是短路，导致实际通过胶和膜的电流会很小。
请问是不是这样？大家做的时候有没有考虑滤纸的问题？

PS：我们不考虑，但转膜效率确实慢，20KDA，60V需要5个小时。
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1楼2012-06-03 19:05:01
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

hongqifei

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2012-09-21 06:56:50
不知道你是湿转还是半干转。湿转的话整个夹子都泡在转膜缓冲液中，不存在短路的问题，而且滤纸海绵只起支撑胶块作用，对离子而言相当于透明的。

转膜效率低会不会是转膜缓冲液的配方问题？电压60V的时候电流有多少呢？
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何须剑道争锋？千人指，万人封，可问江湖鼎峰，三尺秋水尘不染，天下无双。
5楼2012-06-04 10:16:24
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sherrysherry

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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滤纸>硝酸纤维素膜>胶，胶略大一点也没事。我半干转的条件是15V18Min一般都没啥问题
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7楼2012-06-04 13:00:24
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yuyelin

木虫 (正式写手)

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我们湿转，滤纸比胶和膜大呀，一点问题没有。100v，一个小时搞定。
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若嗔若痴，不见风云
8楼2012-06-04 16:13:55
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xuyehu

木虫 (正式写手)

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我们用湿转，滤纸比胶大一些，400mA恒流2.5小时，marker里100-150kd的蛋白能转过去
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12楼2012-06-05 16:29:08
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zhengjia23

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

做WB的时候有一种 专门半干转膜的滤纸，挺好用的。但也可以自己剪普通滤纸。  转膜的时候要考虑到滤纸的大小、膜的大小、和胶的大小。膜大于胶0.5cm左右边长。胶和滤纸最好一样大。
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13楼2012-06-06 21:04:49
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shytcb

铜虫 (小有名气)

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我做半干转，习惯下层滤纸可以稍大些，便于支撑整块PAGE，膜和上层滤纸要小一些，毕竟膜很贵的，不要浪费，而上层滤纸不能与下层接触到，所以小一点，以保万无一失！湿转无所谓的
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15楼2012-08-15 15:59:29
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小兵pp

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

楼主说的是湿转还是半干转？湿转不能小于胶，半干转要略小于胶
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16楼2012-08-16 17:02:52
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普通回帖

telomerase

至尊木虫 (著名写手)

cain
滤纸小于胶或膜，等于也可以，不能够大，否则像你说的会短路的
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我的路靠我的脚踩出来！！！不走寻常路！！！
2楼2012-06-03 23:20:25
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

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我做一般都剪成一样大，半干法转膜，电压小于10 V （按3 mA/cm2），一个半小时搞定。有时候滤纸略大点好像也没见什么影响。
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
3楼2012-06-04 00:57:47
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draco1987

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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两边滤纸不应该接触的，感觉滤纸比胶略小点比较好，但是还是要接近一样大。
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4楼2012-06-04 09:43:36
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废哥117

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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我们用的PVDF膜，剪的一般比胶大一点，等孵抗体的时候再根据目的蛋白分子量和MARKER来裁剪，湿转不存在短路的问题吧，好像短路只存在于半干转的情况
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不断提高自己
6楼2012-06-04 12:48:02
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晴天1882

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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只要上下两层的滤纸不挨到一起就行，挨到一起就会短路，我习惯下层滤纸大些，膜也大些，上层滤纸比膜下就没问题了
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人有绝交，才有至交！
9楼2012-06-05 09:23:41
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寒山拾得

木虫 (小有名气)

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湿转无所谓，干转要注意。
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10楼2012-06-05 12:29:53
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