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gigiloveu

铜虫 (小有名气)

[求助] WB三明治--滤纸大小问题

三明治中,有人说胶和膜两边的滤纸不能挨到,否则即是短路,导致实际通过胶和膜的电流会很小。
请问是不是这样?大家做的时候有没有考虑滤纸的问题?

PS:我们不考虑,但转膜效率确实慢,20KDA,60V需要5个小时。
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hongqifei

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2012-09-21 06:56:50
不知道你是湿转还是半干转。湿转的话整个夹子都泡在转膜缓冲液中,不存在短路的问题,而且滤纸海绵只起支撑胶块作用,对离子而言相当于透明的。

转膜效率低会不会是转膜缓冲液的配方问题?电压60V的时候电流有多少呢?
何须剑道争锋?千人指,万人封,可问江湖鼎峰,三尺秋水尘不染,天下无双。
5楼2012-06-04 10:16:24
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sherrysherry

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
滤纸>硝酸纤维素膜>胶,胶略大一点也没事。我半干转的条件是15V18Min一般都没啥问题
7楼2012-06-04 13:00:24
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yuyelin

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我们湿转,滤纸比胶和膜大呀,一点问题没有。100v,一个小时搞定。
若嗔若痴,不见风云
8楼2012-06-04 16:13:55
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xuyehu

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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我们用湿转,滤纸比胶大一些,400mA恒流2.5小时,marker里100-150kd的蛋白能转过去
12楼2012-06-05 16:29:08
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zhengjia23

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

做WB的时候有一种 专门半干转膜的滤纸,挺好用的。但也可以自己剪普通滤纸。  转膜的时候要考虑到滤纸的大小、膜的大小、和胶的大小。膜大于胶0.5cm左右边长。胶和滤纸最好一样大。
13楼2012-06-06 21:04:49
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shytcb

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我做半干转,习惯下层滤纸可以稍大些,便于支撑整块PAGE,膜和上层滤纸要小一些,毕竟膜很贵的,不要浪费,而上层滤纸不能与下层接触到,所以小一点,以保万无一失!湿转无所谓的
15楼2012-08-15 15:59:29
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小兵pp

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

楼主说的是湿转还是半干转?湿转不能小于胶,半干转要略小于胶
16楼2012-08-16 17:02:52
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普通回帖

telomerase

至尊木虫 (著名写手)

cain

滤纸小于胶或膜,等于也可以,不能够大,否则像你说的会短路的
我的路靠我的脚踩出来!!!不走寻常路!!!
2楼2012-06-03 23:20:25
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

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我做一般都剪成一样大,半干法转膜,电压小于10 V (按3 mA/cm2),一个半小时搞定。有时候滤纸略大点好像也没见什么影响。
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
3楼2012-06-04 00:57:47
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draco1987

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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两边滤纸不应该接触的,感觉滤纸比胶略小点比较好,但是还是要接近一样大。
4楼2012-06-04 09:43:36
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废哥117

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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我们用的PVDF膜,剪的一般比胶大一点,等孵抗体的时候再根据目的蛋白分子量和MARKER来裁剪,湿转不存在短路的问题吧,好像短路只存在于半干转的情况
不断提高自己
6楼2012-06-04 12:48:02
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晴天1882

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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只要上下两层的滤纸不挨到一起就行,挨到一起就会短路,我习惯下层滤纸大些,膜也大些,上层滤纸比膜下就没问题了
人有绝交,才有至交!
9楼2012-06-05 09:23:41
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寒山拾得

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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湿转无所谓,干转要注意。
10楼2012-06-05 12:29:53
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