应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 半定量PCR内参
41/1返回列表
查看: 1422  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

小孽博士

新虫 (小有名气)

[求助] 半定量PCR内参 已有2人参与

做半定量PCR，提RNA反转录成cDNA后扩actin，带非常亮。扩目的基因带时有两条带，经比对后鉴定大的那条是基因组带，小的那条是cDNA带，大小吻合，说明提RNA过程中有DNA未消化干净，cDNA中混有DNA污染。鉴于样本比较多，重新提RNA较麻烦，想了一个办法，请各位虫友帮忙看是否可行。本实验室所用内参为actin2，想在设计actin引物时设计两条跨内含子的引物，j基因组带比cDNA带要长将近200bp, 这样扩actin 的时候就会有两条带，一条基因组带，一条cDNA带。然后我只将cDNA带的亮度调一致，可以认为这就是总cDNA的内参吗？大家觉得可以吗？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
千磨万击还坚劲，任尔东西南北风
1楼 2014-01-13 21:14:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小孽博士: 金币+5, ★有帮助 2014-02-19 20:16:23
我觉得可以，引物肯定是过量的，但有时会不会出现特殊结构使引物更倾向于结合gDNA而导致cDNA扩增量不足。
赞一下 回复此楼
hehe
2楼2014-01-13 21:51:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小孽博士

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lvbobo823 at 2014-01-13 21:51:02
我觉得可以，引物肯定是过量的，但有时会不会出现特殊结构使引物更倾向于结合gDNA而导致cDNA扩增量不足。

我师兄也是这样说，怕有DNA污染或影响cDNA扩增，刚合了引物，做一下试试看吧，谢谢~
赞一下 回复此楼
千磨万击还坚劲，任尔东西南北风
3楼2014-01-13 22:36:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小孽博士: 金币+5, ★有帮助 2014-02-19 20:16:09
不建议这么做。因为当有不同模板竞争引物时，扩增效率可能会降低，会影响定量结果。你可以把为消化干净gDNAd的RNA重新消化，再做反转录。
赞一下 回复此楼
4楼2014-01-13 23:58:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 小孽博士 的主题更新
41/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 284求调剂 +8 天下熯 2026-02-28 8/400 2026-03-02 00:15 by 暮雨星晴
[考研] 材料复试调剂 +3 学材料的点 2026-03-01 4/200 2026-03-02 00:07 by ccp273206157
[考研] 一志愿郑大材料学硕298分，求调剂 +5 wsl111 2026-03-01 5/250 2026-03-01 23:45 by 暮雨星晴
[考研] 江苏省农科院招调剂1名 +3 Qwertyuop 2026-03-01 3/150 2026-03-01 23:18 by aaadim
[考研] 275求调剂 +3 明远求学 2026-03-01 3/150 2026-03-01 22:29 by 刘兵
[考研] 0805总分292，求调剂 +7 幻想之殇 2026-03-01 7/350 2026-03-01 21:22 by 公瑾逍遥
[考研] 高分子化学与物理调剂 +6 好好好1233 2026-02-28 12/600 2026-03-01 19:48 by 好好好1233
[考研] 0856化工专硕求调剂 +12 董boxing 2026-03-01 12/600 2026-03-01 19:45 by 材子momo
[考研] 272求调剂 +6 材紫有化 2026-02-28 6/300 2026-03-01 18:58 by 18137688336
[考博] 26申博 +4 想申博！ 2026-02-26 6/300 2026-03-01 17:32 by 想申博！
[考研] 化工专硕348，一志愿985求调剂 +5 弗格个 2026-02-28 8/400 2026-03-01 17:25 by sunny81
[考研] 321求调剂一志愿东北林业大学材料与化工英二数二 +4 虫虫虫虫虫7 2026-03-01 7/350 2026-03-01 16:52 by caszguilin
[基金申请] 刚录用，没有期刊号，但是在线可看的论文可以放为代表作吗 10+3 arang1 2026-03-01 3/150 2026-03-01 16:43 by babero
[考研] 307求调剂 +5 wyyyqx 2026-03-01 5/250 2026-03-01 15:21 by Fff-1
[考研] 317一志愿华南理工电气工程求调剂 +6 Soliloquy_Q 2026-02-28 11/550 2026-03-01 11:14 by 歌liekkas
[考博] 博士自荐 +4 kkluvs 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:19 by 馥安馥安
[论文投稿] Optics letters投稿被拒求助 30+3 luckyry 2026-02-26 4/200 2026-03-01 09:06 by babero
[考研] 材料调剂 +4 爱擦汗的可乐冰 2026-02-28 4/200 2026-03-01 00:38 by 猫猫球alter
[考研] 304求调剂 +3 52hz~~ 2026-02-28 5/250 2026-03-01 00:00 by 52hz~~
[考研] 264求调剂 +3 巴拉巴拉根556 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:31 by gaoxiaoniuma
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭