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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » qRTPCR内参基因是不是每次都要做
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wangxb1233

木虫 (正式写手)

[交流] qRTPCR内参基因是不是每次都要做 已有6人参与

原来做qRT实验的时候总是把目的基因和内参基因同时做，目的基因做三次重复，内参基因做3次重复，如果下次做另外一个基因还做这批样品的时候，目的基因3次重复，同样的内参再做3次，感觉同样的样品如果放置的时间不长，以后内参基因是不是就不用再重复了呢，是否可以用第一次的结果呢？大家什么意见。。
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1楼 2012-12-25 12:16:34
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heroyl

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
理论上是可以的，我也是这么干的！
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实验虐我千百遍，我待实验如初恋
2楼2012-12-25 13:21:26
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wangxb1233

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by heroyl at 2012-12-25 13:21:26
理论上是可以的，我也是这么干的！

感觉如何？
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3楼2012-12-25 15:50:26
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
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我是每次做内参的。一般情况下的重复性不错，不过冻化过的cDNA做出的CT数还是会有一点差别的。
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4楼2012-12-25 15:51:55
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wangxb1233

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-25 15:51:55
我是每次做内参的。一般情况下的重复性不错，不过冻化过的cDNA做出的CT数还是会有一点差别的。

看来最好不要反复冻融！
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5楼2012-12-25 15:58:05
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gdj363702043

金虫 (正式写手)
不需要
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加油努力
6楼2012-12-25 16:11:34
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wangxb1233

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by gdj363702043 at 2012-12-25 16:11:34
不需要

相当肯定啊！
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7楼2012-12-25 17:08:55
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lovelydong

铜虫 (小有名气)
★
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建议每次都做，数据更有说服力。
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8楼2012-12-25 17:11:12
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heroyl

木虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
3楼: Originally posted by wangxb1233 at 2012-12-25 15:50:26
感觉如何？...

还可以吧。确实有的情况下样本太多一直做内参一方面挺烦的，另一方面也挺浪费的！
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实验虐我千百遍，我待实验如初恋
9楼2012-12-26 09:08:38
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wanhj

木虫 (小有名气)
★
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还是奥做的
减小样品批次间的误差
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10楼2012-12-26 09:31:07
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