应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】qRT-PCR
171/1返回列表
查看: 3286  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

wangy0908

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】qRT-PCR

我在做qRT-PCT实验时，同一引物与同一批材料在两次技术重复中所得到的CT值不一样，差异很大，这是为什么阿。引物的特异性以及标准曲线都很好。请教各位高手！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-11-30 05:14:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

littlehong

木虫 (初入文坛)
★
dhd997(金币+1):很活跃，鼓励 2010-11-30 08:35:25
wangy0908(金币+2): 2010-11-30 21:58:35
qPCR的稳定性是不是特别好，建议一次多做重复，取平均值，算方差，才有统计意义
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-11-30 08:34:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangy0908

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by littlehong at 2010-11-30 08:34:58:
qPCR的稳定性是不是特别好，建议一次多做重复，取平均值，算方差，才有统计意义

因为前段时间做出来的两次重复都很吻合。看来只能多做重复了的。你们一般都做的几次技术重复的呢。以及CT的差异在多大的范围类可以接受的呢！在0.3个循环内可以不的??
赞一下 回复此楼
3楼2010-11-30 21:58:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zjlck

新虫 (初入文坛)
wangy0908(金币+1): 2010-12-01 00:05:38
我一般在一次pcr中做三个重复，配成mix，然后分装，最后加模板，重复性挺好，一般差0.1个循环左右
赞一下 回复此楼
4楼2010-11-30 22:41:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Silencess

金虫 (小有名气)
能像你请教标准曲线的问题么~~~~~~~~谢谢~~~~~~
赞一下 回复此楼
5楼2010-11-30 23:22:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangy0908

金虫 (正式写手)
你是想问那方面的呢？？
赞一下 回复此楼
6楼2010-11-30 23:54:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangy0908

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by zjlck at 2010-11-30 22:41:00:
我一般在一次pcr中做三个重复，配成mix，然后分装，最后加模板，重复性挺好，一般差0.1个循环左右

由于我的样本量比较大，一次PCR只能做两次重复，所以我就做了两次技术重复(两次PCR)。但是这两次pcr得差异很大。在单次PCR里面得两次重复差异最大的在0.3左右的，基本是在0.1-0.2。以及我用的是14ul 体系。这个是不是体系大一些会更加稳定一些的 呢？？
赞一下 回复此楼
7楼2010-12-01 00:00:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)
原则上每一次都需要做标准曲线，这样比对才有意义的
赞一下 回复此楼
8楼2010-12-01 00:01:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangy0908

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by xiaoyu1014126 at 2010-12-01 00:01:41:
原则上每一次都需要做标准曲线，这样比对才有意义的

每一次都要做标准曲线是什么意思的呢？你是说在每次pcr里面都要跑一次标准曲线的还是什么的呢？
赞一下 回复此楼
9楼2010-12-01 00:10:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

love_st

金虫 (著名写手)
看下CV值嘛
回复此楼
10楼2010-12-01 09:46:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)
★ ★
scelab(金币+2):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-12-03 23:08:57
就是说每一次开机对未知样品进行定量的时候，都要做一个标准曲线，而不能用前面以前做的标线来进行标定，因为PCR每一次的进程都不是完全一样的，肯定存在误差，所以就是这样了
引用回帖:
Originally posted by wangy0908 at 2010-12-01 00:10:26:

每一次都要做标准曲线是什么意思的呢？你是说在每次pcr里面都要跑一次标准曲线的还是什么的呢？

赞一下(1人) 回复此楼
11楼2010-12-02 08:49:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amilie030312

金虫 (正式写手)
wangy0908(金币+1): 2010-12-02 23:07:24
同一个样本作三次重复，以便有一个不好的时候舍弃掉
赞一下 回复此楼
12楼2010-12-02 09:16:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)
关键要看你的内参的重复情况
赞一下 回复此楼
13楼2010-12-02 10:31:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangy0908

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by silicare at 2010-12-02 10:31:05:
关键要看你的内参的重复情况

就是在筛选内参基因的时候出现这种情况。内参的标准曲线很好，但是却出现不能重复的现象！
赞一下 回复此楼
14楼2010-12-02 23:09:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)
引用回帖:
Originally posted by wangy0908 at 2010-12-02 22:09:05:

就是在筛选内参基因的时候出现这种情况。内参的标准曲线很好，但是却出现不能重复的现象！

内参基因怎么重复？  不同样本的内参ct一样？？？？
赞一下 回复此楼
15楼2010-12-03 08:31:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangy0908

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by silicare at 2010-12-03 08:31:48:



内参基因怎么重复？  不同样本的内参ct一样？？？？

就是同意内参基因在同一批样品里面，在两次和三次的技术重复中得到的ct不一样。
赞一下 回复此楼
16楼2010-12-03 21:54:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)
★ ★
dhd997(金币+2):热心鼓励 2010-12-04 08:17:47
wangy0908(金币+1): 2010-12-05 09:49:09
引用回帖:
Originally posted by wangy0908 at 2010-12-03 20:54:31:

就是同意内参基因在同一批样品里面，在两次和三次的技术重复中得到的ct不一样。

同一管里的模板扩内参然后ct不一样？

那多半就是 加样问题了，加 passive  reference dye 吧
赞一下(1人) 回复此楼
17楼2010-12-04 08:09:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wangy0908 的主题更新
171/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +25 yaoyewhu2008 2026-08-20 27/1350 2026-08-25 08:01 by Equinoxhua
[基金申请] 我面上完蛋了 +11 且听虎啸 2026-08-20 12/600 2026-08-25 07:53 by bugaboo
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 0XLacIJUOj8D 2026-08-24 8/400 2026-08-25 05:12 by BZKMTicpDhFj
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +7 scalable 2026-08-24 7/350 2026-08-24 23:01 by anata1209
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +7 图啦图啦 2026-08-24 8/400 2026-08-24 22:00 by maomao_da
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +21 koalala 2026-08-24 24/1200 2026-08-24 19:25 by 家与远方
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +14 ziyangfang 2026-08-19 17/850 2026-08-24 18:37 by 哈哈蛤？
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +17 羊腰板 2026-08-21 19/950 2026-08-24 16:52 by iaeyuan
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 21/1050 2026-08-24 14:21 by refreshing11
[基金申请] 估计是周四 +4 archvillain 2026-08-18 4/200 2026-08-24 13:53 by zzuzxg
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 17/850 2026-08-24 10:20 by echo8914667
[基金申请] 什么时候开奖？ +10 CrisMessi 2026-08-18 11/550 2026-08-24 06:50 by 开心的小狮子
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭