| 查看: 5206 | 回复: 14 | ||
yangqi金虫 (小有名气)
|
[求助]
RT-PCR的cDNA不能扩增出目的条带，只有内参基因能扩增出来
|
|
|
大家好！ 我近期在做RT-PCR，一共有四个模板，来源于同一个细菌。内参选择的是16sRNA，另外还选择了两对目的基因。 提取RNA后，经DNA酶消化后，以反转录后得到cDNA为模板，用普通PCR扩增，但是只有16sRNA是在每个样本中都可以得到的，目的基因在其中的两个样本中无法得到，不知道是什么原因。求各位高手解惑！ 这是我所提RNA的图片，其中第1、2、3泳道为1、2、3样本，后面两个泳道为第4个样本。 逆转录后得到的图如下，基因分别为16sRNA、目的基因1和2（从右到左）。泳道有点糊的是DNA做的阳参。 后面我又重新做了一次，结果更差了 希望大家批评指正，感激不尽！  第二次的结果  第一次的结果  RNA检测的结果 |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有221人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- rna终于提取出来了，可是反转录pcr（rt pcr）没有条带
已经有19人回复
- 【求助】用cDNA的ORF序列以基因组DNA为模板 做PCR 为何P不出其对应的基因组序列?
已经有8人回复
- PCR退火温度态度会导致扩增不出目的条带么？
已经有4人回复
- RT-PCR时GAPDH能跑出来，但目的条带跑不出来~~
已经有7人回复
- RT后扩增到的条带出现非特异性，该如何处理
已经有4人回复
- cDNA做普通PCR扩不出条带来
已经有13人回复
- 【求助/交流】PCR扩增后没有条带是怎么回事?
已经有5人回复
- 【求助/交流】RT-PCR总是得不到目的条带
已经有12人回复
- RT-PCR后的cDNA呢？
已经有17人回复
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ...
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-08-10 13:53:30
yangqi: 金币+100, ★★★很有帮助, 谢谢！ 2012-08-10 16:04:25
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-08-10 13:53:30
yangqi: 金币+100, ★★★很有帮助, 谢谢！ 2012-08-10 16:04:25
|
1.楼主的基因是否为低拷贝基因？我曾经克隆一个低拷贝基因，提了50个RNA样品，只有3个扩增出来了。楼主扩增不出可能跟所提样品太少有关系。 2.楼主的基因是否是较长片段？由于RNA降解导致cDNA不完整，如果片段较长也可能扩增不出来，建议楼主分段设计引物进行拼接。 3.建议使用活性较高的taq酶进行pcr，有些高保真的酶就是扩不出来。 4.建议楼主在目的基因内部（最好是3‘端）设计较短序列的一对引物，对你这三个样品进行pcr看看。 |
2楼2012-08-10 12:50:07
4楼2012-08-10 16:12:47
yangqi
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1627.5
- 散金: 180
- 帖子: 106
- 在线: 82小时
- 虫号: 1203783
- 注册: 2011-02-15
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
3楼2012-08-10 16:08:39
yangqi
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1627.5
- 散金: 180
- 帖子: 106
- 在线: 82小时
- 虫号: 1203783
- 注册: 2011-02-15
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
5楼2012-08-10 16:28:29
6楼2012-08-10 17:15:24
yangqi
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1627.5
- 散金: 180
- 帖子: 106
- 在线: 82小时
- 虫号: 1203783
- 注册: 2011-02-15
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
7楼2012-08-10 17:32:30
8楼2012-08-10 17:48:43
yangqi
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1627.5
- 散金: 180
- 帖子: 106
- 在线: 82小时
- 虫号: 1203783
- 注册: 2011-02-15
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
9楼2012-08-11 09:18:10
vickie20
铜虫 (小有名气)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 852.2
- 散金: 6
- 帖子: 254
- 在线: 206.5小时
- 虫号: 1348865
- 注册: 2011-07-18
- 性别: MM
- 专业: 果树学
10楼2012-08-12 21:32:52
