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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » RT-PCR时GAPDH能跑出来，但目的条带跑不出来~~
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马龙sweeting

木虫 (正式写手)

[交流] RT-PCR时GAPDH能跑出来，但目的条带跑不出来~~

RT-PCR时GAPDH能跑出来，但目的条带跑不出来~~觉得既然GAPDH能出来，应该说明cDNA没问题吧，那为什么目的基因跑不出来，怀疑是目的基因的引物有问题~~请高手帮忙分析下看可能是什么原因，我给忽略掉了~~难道是因为GAPDH这个基因特别好跑吗~~不过听别人做过的说可以多跑几次就会出来，是这样吗~~请各位帮忙分析下~~
另~~我提的RNA浓度和纯度测得都很好，但是跑出来的三条带5S看不出来，这样反转出来的cDNA没问题吧~~
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小鱼凶猛

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1楼2012-03-14 10:00:12
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ken126

新虫 (小有名气)
★
马龙sweeting(金币+1): 谢谢参与
引物是自己设计或是引用他人的？目的基因的PCR产物有多大？
另外请问一下，5s是什么？没听说过哦
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2楼2012-03-15 13:27:46
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马龙sweeting

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ken126 at 2012-03-15 13:27:46:
引物是自己设计或是引用他人的？目的基因的PCR产物有多大？
另外请问一下，5s是什么？没听说过哦

引物是别人设计的~~PCR产物400~600大小~~
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3楼2012-03-24 10:07:46
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wtyyyyy1988

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★
马龙sweeting(金币+1): 谢谢参与
telomerase: 金币+2, 挺好 2012-03-24 19:56:17
1.RNA按照你的说法23S和18S都很正常并且5S几乎看不到，质量应该是可以的
2.GAPDH是管家基因，含量肯定比你的目的基因要高，它跑出来了说明你的CDNA是没有问题的
3.目的条带没有跑出来不知道是什么样的情况，是完全没有任何东西只跑出了引物二聚体，还是有其他的拖尾的情况出现；假如是完全没有条带只有引物二聚体就要怀疑你的引物特异性或者你的目的基因是否含量很低；假如是有拖尾的情况那就是你退火温度不合适
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4楼2012-03-24 11:22:15
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小鱼凶猛

新虫 (初入文坛)
★
马龙sweeting(金币+1): 谢谢参与
送鲜花一朵
受教了，我也遇到同样的问题。我的是actin跑出来了，但是目的基因没显示，全是引物二聚体！
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5楼2012-03-29 09:54:18
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cfynocry

银虫 (小有名气)
★
马龙sweeting(金币+1): 谢谢参与
我想请问你的RNA电泳是怎么做的呀，赐教呀http://bbs.bbioo.com/forum.php?m ... d=147879&extra=。这是我的帖子，麻烦有空看下给我指导下呀
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6楼2012-04-14 23:49:17
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joanne4

金虫 (小有名气)
★
马龙sweeting(金币+1): 谢谢参与
也用的是GAPDH   目的基因长1.2kb  遇到一样的问题
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7楼2012-04-17 15:46:59
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sunzhengwang

铁虫 (小有名气)
★
马龙sweeting(金币+1): 谢谢参与
我也遇到同样的问题
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8楼2013-04-01 15:20:25
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