应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 高氏一号分离的菌用16S通用引物扩增不出条带
101/1返回列表
查看: 3074  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

WSW_Alone

木虫 (著名写手)

[求助] 高氏一号分离的菌用16S通用引物扩增不出条带

如题，最近用高氏一号涂布并分离保存菌种，肉眼观察应该都是细菌，进行鉴定的时候（模板直接是扎菌/菌液）用16S通用引物8f,1492r进行直接PCR，但是基本上扩增不出条带，即使扩增出来条带也很淡。
请教一下各位前辈这是什么情况？不胜感激。

PCR产物电泳结果
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
處世樹為模，本固任從枝葉動；立身錢作樣，內方還要外邊圓。
1楼 2012-03-22 00:39:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feierorange

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
WSW_Alone: 金币+1, ★有帮助 2012-05-04 01:13:34
我们实验室做的都可以啊，应该和培养基关系不大吧，是不是PCR过程的问题呢？ps:我们用的引物是27f, 1492r或1525r了
赞一下 回复此楼
2楼2012-03-22 09:27:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

WSW_Alone

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by feierorange at 2012-03-22 09:27:33:
我们实验室做的都可以啊，应该和培养基关系不大吧，是不是PCR过程的问题呢？ps:我们用的引物是27f, 1492r或1525r了

你们预处理是怎样的？ps：引物关系很大吗？
赞一下 回复此楼
處世樹為模，本固任從枝葉動；立身錢作樣，內方還要外邊圓。
3楼2012-03-22 09:29:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feierorange

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by WSW_Alone at 2012-03-22 09:29:38:
你们预处理是怎样的？ps：引物关系很大吗？

预处理很简单，就是菌体洗涤一下，也用的菌液，8f我没用过，不太清楚，PCR出问题的原因会比较多了，你是别的培养基都可以，唯独高氏一号不行吗？
赞一下 回复此楼
4楼2012-03-22 09:39:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

WSW_Alone

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by feierorange at 2012-03-22 09:39:40:
预处理很简单，就是菌体洗涤一下，也用的菌液，8f我没用过，不太清楚，PCR出问题的原因会比较多了，你是别的培养基都可以，唯独高氏一号不行吗？

别的出来了大部分，高氏一号的90%都出不来。
赞一下 回复此楼
處世樹為模，本固任從枝葉動；立身錢作樣，內方還要外邊圓。
5楼2012-03-22 09:48:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

girlfisher

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
WSW_Alone: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-05-04 01:13:21
WSW_Alone: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-05-04 01:13:49
高氏一号分离放线菌，放线菌为G+，high G+C菌。一般直接菌体PCR细胞不易破碎，建议提取DNA再做PCR
赞一下 回复此楼
6楼2012-03-22 11:45:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

WSW_Alone

木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by girlfisher at 2012-03-22 11:45:05:
高氏一号分离放线菌，放线菌为G+，high G+C菌。一般直接菌体PCR细胞不易破碎，建议提取DNA再做PCR

你们一般采用什么方法提取DNA？
赞一下 回复此楼
處世樹為模，本固任從枝葉動；立身錢作樣，內方還要外邊圓。
7楼2012-03-23 09:27:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoyong1982

禁虫 (小有名气)
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
WSW_Alone: 金币+2, ★有帮助 2012-05-04 01:13:06
本帖内容被屏蔽
8楼2012-03-23 11:01:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

WSW_Alone

木虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by xiaoyong1982 at 2012-03-23 11:01:45:
我也做过直接挑菌和提DNA做PCR，还是提DNA以后效果好很多，所以一般都是提DNA后再PCR，用普通的试剂盒做起来还是比较快的，有些菌在PCR体系里裂解不是很好

你说的这个情况可能是高氏一号培养基里的成分对PCR有 ...

是这样的，我高氏一号里面的菌是液体培养之后，用菌液作为模板进行扩增的。
赞一下 回复此楼
處世樹為模，本固任從枝葉動；立身錢作樣，內方還要外邊圓。
9楼2012-03-24 17:56:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jocelyn2012

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
WSW_Alone: 金币+2, ★有帮助 2012-05-04 01:12:55
应该是丝状菌的因素，以下是我在论坛上见到的最简单的方法，lz可以试下（我也没试过）
牙签挑取少量菌体（不用任何溶液）至PCR管,微波炉高火2至3min,加入PCR MIXTURE,混匀,加酶反应即可
注：菌体不要太多,一点点就够了,微波炉加热后再用枪头多吸打几次,让DNA充分溶出, 你做下试试,祝好运
（非原创，但一时找不到那帖子在哪，先用了）
赞一下 回复此楼
10楼2012-05-03 14:44:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 WSW_Alone 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 68gx6bh3ei 2026-07-09 3/150 2026-07-10 06:53 by pbuc7it0i8
[硕博家园] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 68gx6bh3ei 2026-07-09 3/150 2026-07-10 06:33 by pbuc7it0i8
[硕博家园] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 ph7bxbho8f 2026-07-09 3/150 2026-07-10 05:53 by j4frgf6zcw
[教师之家] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 al9t2f50x3 2026-07-09 4/200 2026-07-10 05:33 by j4frgf6zcw
[基金申请] b口会评 +6 当空照 2026-07-08 6/300 2026-07-09 20:49 by tonyliu0401
[基金申请] 信息学部会评时间 +3 xuel2011 2026-07-06 3/150 2026-07-09 19:05 by mollyzhang_2003
[基金申请] 祈祷青基必中 50+3 hadengry 2026-07-09 9/450 2026-07-09 17:37 by 文杰猪猪
[考研] 在职考研 +6 wu5d 2026-07-08 7/350 2026-07-09 16:40 by 化工小霸王呀
[论文投稿] MSER送审了还被拒稿 +3 S778950906 2026-07-08 5/250 2026-07-09 15:46 by S778950906
[基金申请] 关于如何从代码看上不上会 +11 且听虎啸 2026-07-09 14/700 2026-07-09 15:27 by libeny
[有机交流] 硝基还原 20+3 暮年飞雪 2026-07-07 5/250 2026-07-09 13:30 by tfang
[基金申请] 化学口会评？应用基础研究和基础研究，希望能分开 +3 Tide man 2026-07-08 3/150 2026-07-09 11:36 by dede5556
[基金申请] 今年E04面上 +15 布布和一二 2026-07-05 21/1050 2026-07-09 10:25 by 学员fOzRO9
[硕博家园] 大龄残疾硕士的一点执念 +14 3776737374 2026-07-06 22/1100 2026-07-09 06:07 by lovechizi
[基金申请] 生命口会评 +4 wuke100666 2026-07-07 4/200 2026-07-08 16:38 by 逍遥不够自在
[教师之家] 网络举报学术不端成为了男女之间情杀的手段了，真荒唐。。。 +3 zju2000 2026-07-04 3/150 2026-07-07 21:00 by hyx552200
[有机交流] Suzuki偶联中硼酸酯原料掉下的硼酸酯是否可以自身偶联，生成B2Pin2杂质 500+3 天下大同 2026-07-06 3/150 2026-07-07 10:31 by martyr_oyx
[论文投稿] 刑法学论文投稿求助 +3 高源678 2026-07-04 5/250 2026-07-06 12:20 by 平天尺
[论文投稿] Journal of Environmental Chemical Engineering +3 雪花天涯 2026-07-05 3/150 2026-07-06 09:00 by bobvan
[基金申请] 最后一年，祈求好运 +3 pyw1992 2026-07-06 3/150 2026-07-06 08:53 by 苏_frp
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭