应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 高氏一号分离的菌用16S通用引物扩增不出条带
汕头大学海洋科学接受调剂
101/1返回列表
查看: 2735  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

WSW_Alone

木虫 (著名写手)

[求助] 高氏一号分离的菌用16S通用引物扩增不出条带

如题，最近用高氏一号涂布并分离保存菌种，肉眼观察应该都是细菌，进行鉴定的时候（模板直接是扎菌/菌液）用16S通用引物8f,1492r进行直接PCR，但是基本上扩增不出条带，即使扩增出来条带也很淡。
请教一下各位前辈这是什么情况？不胜感激。

PCR产物电泳结果
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
處世樹為模，本固任從枝葉動；立身錢作樣，內方還要外邊圓。
1楼 2012-03-22 00:39:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feierorange

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
WSW_Alone: 金币+1, ★有帮助 2012-05-04 01:13:34
我们实验室做的都可以啊，应该和培养基关系不大吧，是不是PCR过程的问题呢？ps:我们用的引物是27f, 1492r或1525r了
赞一下 回复此楼
2楼2012-03-22 09:27:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

WSW_Alone

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by feierorange at 2012-03-22 09:27:33:
我们实验室做的都可以啊，应该和培养基关系不大吧，是不是PCR过程的问题呢？ps:我们用的引物是27f, 1492r或1525r了

你们预处理是怎样的？ps：引物关系很大吗？
赞一下 回复此楼
處世樹為模，本固任從枝葉動；立身錢作樣，內方還要外邊圓。
3楼2012-03-22 09:29:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feierorange

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by WSW_Alone at 2012-03-22 09:29:38:
你们预处理是怎样的？ps：引物关系很大吗？

预处理很简单，就是菌体洗涤一下，也用的菌液，8f我没用过，不太清楚，PCR出问题的原因会比较多了，你是别的培养基都可以，唯独高氏一号不行吗？
赞一下 回复此楼
4楼2012-03-22 09:39:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

WSW_Alone

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by feierorange at 2012-03-22 09:39:40:
预处理很简单，就是菌体洗涤一下，也用的菌液，8f我没用过，不太清楚，PCR出问题的原因会比较多了，你是别的培养基都可以，唯独高氏一号不行吗？

别的出来了大部分，高氏一号的90%都出不来。
赞一下 回复此楼
處世樹為模，本固任從枝葉動；立身錢作樣，內方還要外邊圓。
5楼2012-03-22 09:48:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

girlfisher

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
WSW_Alone: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-05-04 01:13:21
WSW_Alone: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-05-04 01:13:49
高氏一号分离放线菌，放线菌为G+，high G+C菌。一般直接菌体PCR细胞不易破碎，建议提取DNA再做PCR
赞一下 回复此楼
6楼2012-03-22 11:45:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

WSW_Alone

木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by girlfisher at 2012-03-22 11:45:05:
高氏一号分离放线菌，放线菌为G+，high G+C菌。一般直接菌体PCR细胞不易破碎，建议提取DNA再做PCR

你们一般采用什么方法提取DNA？
赞一下 回复此楼
處世樹為模，本固任從枝葉動；立身錢作樣，內方還要外邊圓。
7楼2012-03-23 09:27:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoyong1982

禁虫 (小有名气)
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
WSW_Alone: 金币+2, ★有帮助 2012-05-04 01:13:06
本帖内容被屏蔽
8楼2012-03-23 11:01:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

WSW_Alone

木虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by xiaoyong1982 at 2012-03-23 11:01:45:
我也做过直接挑菌和提DNA做PCR，还是提DNA以后效果好很多，所以一般都是提DNA后再PCR，用普通的试剂盒做起来还是比较快的，有些菌在PCR体系里裂解不是很好

你说的这个情况可能是高氏一号培养基里的成分对PCR有 ...

是这样的，我高氏一号里面的菌是液体培养之后，用菌液作为模板进行扩增的。
赞一下 回复此楼
處世樹為模，本固任從枝葉動；立身錢作樣，內方還要外邊圓。
9楼2012-03-24 17:56:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jocelyn2012

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
WSW_Alone: 金币+2, ★有帮助 2012-05-04 01:12:55
应该是丝状菌的因素，以下是我在论坛上见到的最简单的方法，lz可以试下（我也没试过）
牙签挑取少量菌体（不用任何溶液）至PCR管,微波炉高火2至3min,加入PCR MIXTURE,混匀,加酶反应即可
注：菌体不要太多,一点点就够了,微波炉加热后再用枪头多吸打几次,让DNA充分溶出, 你做下试试,祝好运
（非原创，但一时找不到那帖子在哪，先用了）
赞一下 回复此楼
10楼2012-05-03 14:44:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 WSW_Alone 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 复试调剂 +18 积极向上； 2026-04-10 20/1000 2026-04-14 16:11 by zs92450
[考研] 一志愿哈工大 085600 277 12材科基求调剂 5+5 chenny174 2026-04-10 37/1850 2026-04-14 07:39 by Abskk
[考研] 22专硕求调剂 +8 haoyun上岸 2026-04-11 10/500 2026-04-13 22:15 by zhq0425
[基金申请] 2026 WR青拔 +3 冬日阳光CAS 2026-04-09 6/300 2026-04-13 18:40 by liuchb715
[考研] 一志愿鲁东大学071000生物学学硕初试分数276求调剂 +8 慕绝cc 2026-04-09 8/400 2026-04-13 14:08 by 张zhihao
[考研] 0854调剂 +12 长弓傲 2026-04-09 13/650 2026-04-12 09:56 by 逆水乘风
[考研] 求调剂，262机械专硕 +8 嗯yyl 2026-04-08 8/400 2026-04-12 02:31 by 秋豆菜芽
[考研] 331求调剂 +5 王国帅 2026-04-11 5/250 2026-04-11 22:56 by 溪涧流水
[考研] 283求调剂 +22 那个噜子 2026-04-09 22/1100 2026-04-11 10:41 by 逆水乘风
[考研] 085506-求调剂-285分 +3 雷欧飞踢 2026-04-08 3/150 2026-04-11 08:37 by zhq0425
[考研] 342电子信息专硕求调剂 +9 你让我怎么荔枝 2026-04-10 10/500 2026-04-11 08:33 by zhq0425
[考研] 263能源动力专硕求调剂 +4 加大号饭盒袋 2026-04-10 4/200 2026-04-10 20:52 by gong120082
[考研] 中科院总分315求调剂 +8 lallalh 2026-04-09 8/400 2026-04-10 19:30 by dick_runner
[考研] 085800 能源动力求调剂 +6 阿biu啊啊啊啊啊 2026-04-10 6/300 2026-04-10 15:03 by hemengdong
[考研] 282，电气工程专业，求调剂，不挑专业 +9 jggshjkkm 2026-04-10 9/450 2026-04-10 14:55 by 逆水乘风
[考研] 367求调剂 +10 hffQAQ 2026-04-09 10/500 2026-04-09 18:06 by lijunpoly
[考研] 化学工程与技术专业一志愿哈工程 291分B区 国家级大创负责人 有一作论文 +13 Emmy~ 2026-04-09 13/650 2026-04-09 14:47 by only周
[考研] 调剂 +12 月@163.com 2026-04-08 12/600 2026-04-09 14:27 by rl1980
[考研] 283电子信息求调剂 +4 三石WL 2026-04-08 4/200 2026-04-09 10:21 by wp06
[考研] 电子信息346 +4 zuoshaodian 2026-04-08 4/200 2026-04-08 11:54 by zzucheup
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭