应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 高氏一号分离的菌用16S通用引物扩增不出条带
101/1返回列表
查看: 2611  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

WSW_Alone

木虫 (著名写手)

[求助] 高氏一号分离的菌用16S通用引物扩增不出条带

如题，最近用高氏一号涂布并分离保存菌种，肉眼观察应该都是细菌，进行鉴定的时候（模板直接是扎菌/菌液）用16S通用引物8f,1492r进行直接PCR，但是基本上扩增不出条带，即使扩增出来条带也很淡。
请教一下各位前辈这是什么情况？不胜感激。

PCR产物电泳结果
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
處世樹為模，本固任從枝葉動；立身錢作樣，內方還要外邊圓。
1楼 2012-03-22 00:39:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feierorange

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
WSW_Alone: 金币+1, ★有帮助 2012-05-04 01:13:34
我们实验室做的都可以啊，应该和培养基关系不大吧，是不是PCR过程的问题呢？ps:我们用的引物是27f, 1492r或1525r了
赞一下 回复此楼
2楼2012-03-22 09:27:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

WSW_Alone

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by feierorange at 2012-03-22 09:27:33:
我们实验室做的都可以啊，应该和培养基关系不大吧，是不是PCR过程的问题呢？ps:我们用的引物是27f, 1492r或1525r了

你们预处理是怎样的？ps：引物关系很大吗？
赞一下 回复此楼
處世樹為模，本固任從枝葉動；立身錢作樣，內方還要外邊圓。
3楼2012-03-22 09:29:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feierorange

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by WSW_Alone at 2012-03-22 09:29:38:
你们预处理是怎样的？ps：引物关系很大吗？

预处理很简单，就是菌体洗涤一下，也用的菌液，8f我没用过，不太清楚，PCR出问题的原因会比较多了，你是别的培养基都可以，唯独高氏一号不行吗？
赞一下 回复此楼
4楼2012-03-22 09:39:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

WSW_Alone

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by feierorange at 2012-03-22 09:39:40:
预处理很简单，就是菌体洗涤一下，也用的菌液，8f我没用过，不太清楚，PCR出问题的原因会比较多了，你是别的培养基都可以，唯独高氏一号不行吗？

别的出来了大部分，高氏一号的90%都出不来。
赞一下 回复此楼
處世樹為模，本固任從枝葉動；立身錢作樣，內方還要外邊圓。
5楼2012-03-22 09:48:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

girlfisher

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
WSW_Alone: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-05-04 01:13:21
WSW_Alone: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-05-04 01:13:49
高氏一号分离放线菌，放线菌为G+，high G+C菌。一般直接菌体PCR细胞不易破碎，建议提取DNA再做PCR
赞一下 回复此楼
6楼2012-03-22 11:45:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

WSW_Alone

木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by girlfisher at 2012-03-22 11:45:05:
高氏一号分离放线菌，放线菌为G+，high G+C菌。一般直接菌体PCR细胞不易破碎，建议提取DNA再做PCR

你们一般采用什么方法提取DNA？
赞一下 回复此楼
處世樹為模，本固任從枝葉動；立身錢作樣，內方還要外邊圓。
7楼2012-03-23 09:27:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoyong1982

禁虫 (小有名气)
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
WSW_Alone: 金币+2, ★有帮助 2012-05-04 01:13:06
本帖内容被屏蔽
8楼2012-03-23 11:01:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

WSW_Alone

木虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by xiaoyong1982 at 2012-03-23 11:01:45:
我也做过直接挑菌和提DNA做PCR，还是提DNA以后效果好很多，所以一般都是提DNA后再PCR，用普通的试剂盒做起来还是比较快的，有些菌在PCR体系里裂解不是很好

你说的这个情况可能是高氏一号培养基里的成分对PCR有 ...

是这样的，我高氏一号里面的菌是液体培养之后，用菌液作为模板进行扩增的。
赞一下 回复此楼
處世樹為模，本固任從枝葉動；立身錢作樣，內方還要外邊圓。
9楼2012-03-24 17:56:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jocelyn2012

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
WSW_Alone: 金币+2, ★有帮助 2012-05-04 01:12:55
应该是丝状菌的因素，以下是我在论坛上见到的最简单的方法，lz可以试下（我也没试过）
牙签挑取少量菌体（不用任何溶液）至PCR管,微波炉高火2至3min,加入PCR MIXTURE,混匀,加酶反应即可
注：菌体不要太多,一点点就够了,微波炉加热后再用枪头多吸打几次,让DNA充分溶出, 你做下试试,祝好运
（非原创，但一时找不到那帖子在哪，先用了）
赞一下 回复此楼
10楼2012-05-03 14:44:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 WSW_Alone 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0703 调剂 +3 我可以上岸的对� 2026-03-16 6/300 2026-03-23 08:52 by 醉在风里
[考研] 307求调剂 +11 冷笙123 2026-03-17 11/550 2026-03-22 20:16 by edmund7
[考研] 306求调剂 +5 来好运来来来 2026-03-22 5/250 2026-03-22 16:17 by BruceLiu320
[考研] 275求调剂 +6 shansx 2026-03-22 8/400 2026-03-22 15:27 by barlinike
[考研] 311求调剂 +3 26研0 2026-03-20 3/150 2026-03-22 14:46 by ColorlessPI
[考研] 085600材料与化工306 +4 z1z2z3879 2026-03-21 4/200 2026-03-21 23:44 by ms629
[考研] 0703化学297求调剂 +3 Daisy☆ 2026-03-20 3/150 2026-03-21 17:45 by ColorlessPI
[考研] 299求调剂 +4 某某某某位 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:30 by barlinike
[考研] 316求调剂 +6 梁茜雯 2026-03-19 6/300 2026-03-21 06:32 by Ecowxq666！
[考研] 301求调剂 +10 yy要上岸呀 2026-03-17 10/500 2026-03-21 03:14 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中国石油大学（华东） 本科齐鲁工业大学 +3 石能伟 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:22 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-03-18 6/300 2026-03-21 00:32 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +3 阿姐阿姐家啊 2026-03-18 3/150 2026-03-20 23:24 by JourneyLucky
[考研] 0856调剂，是学校就去 +8 sllhht 2026-03-19 9/450 2026-03-20 14:25 by 无懈可击111
[考研] 085600材料与化工调剂 324分 +10 llllkkkhh 2026-03-18 12/600 2026-03-19 14:33 by llllkkkhh
[考研] 材料工程专硕调剂 +5 204818@lcx 2026-03-17 6/300 2026-03-18 22:55 by 204818@lcx
[考研] 301求调剂 +4 A_JiXing 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:32 by ruiyingmiao
[考研] 085601求调剂 +4 Du.11 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:08 by ruiyingmiao
[考研] 有没有道铁/土木的想调剂南林，给自己招师弟中～ +3 TqlXswl 2026-03-16 7/350 2026-03-17 15:23 by TqlXswl
[考研] 333求调剂 +3 文思客 2026-03-16 7/350 2026-03-16 18:21 by 文思客
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭