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jianghuifu银虫 (初入文坛)
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相同条件的pcr产物，跑出不同的条带，是什么原因[/img][/img][/img]
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这图为什么会有明暗不一样的，开始想可能与pcr产物的浓度有关，所以特意测了下浓度，结果好像又没什么很大关系，实在找不出原因，而且第十条有点弥散，是浓度太大啦，还是什么原因？？还有就是前五条好像后面还有条带，这个又是什么原因？？ 注：前五条的加样体系为 10*buffer 3微升 BSA 1.2 L（引） 0.3 R（引） 0.3 taq 0.6 dNTP 0.8 DNA 1.0 ddH2O 补到30 后五条就是dNTP和DNA均为0.6，其他的一样。  从左边数起，前五条和后五条的加氧系统不一样，但pcr循环系统一样，而且是降落pcr  这个测的是pcr产物的浓度，这里的数据第一行是空白，接下来的十行和上面的十条条带一一对应，第一列为pcr产物的浓度，第三四五列分别是D260,D280，D260/D280值  线圈起来的里面隐隐约约可以看到条带，而后五条看不出来。 |
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【答案】应助回帖
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| 你没有标明Marker的大小，不过底下的模糊条带应该是引物二聚体，明暗当然和PCR产物浓度有关了，之所以测出来没太大区别就是因为底下的引物二聚体造成的。至于每管都不一样，可能是PCR仪加热降温不一致造成的， |
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jianghuifu2楼2012-03-05 07:24:33
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【答案】应助回帖
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| PCR仪里有的孔可能反应不均一，我们做PCR的时候偶尔也会出现这种问题，就是同时做的一批管，有的空能扩得好，有的扩不出来（加的东西完全一样），我觉得这是仪器的问题。另外，能看到引物二聚体是因为合成出来的产物少吧，就是可能你的DNA模版没能得到有效合成，剩下的引物多了就形成二聚体，合成效率高能充分利用引物了，那么形成的引物二聚体就少了。这是我个人的理解。 |
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6楼2012-03-05 09:19:41
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