应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 胶回收产物连接转化后菌液PCR电泳条带出现问题
91/1返回列表
查看: 3442  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

zhiqiang5070

木虫 (正式写手)

[求助] 胶回收产物连接转化后菌液PCR电泳条带出现问题

我的cDNA胶回收后条带约1000kb强，之后连接到T载体上（将回收产物与pMD18-T载体16℃连接过夜，胶回收DNA4.5微，T载体 0.5微，SolutionI  5微升），之后转化到天根公司Ｅ.ｃｏｌｉ感受态细胞中，接菌，挑菌后摇菌。之后菌液ＰＣＲ（自己的引物和Ｍ１３引物分别跑了都差不多），可是电泳条带发生改变，出现了２０００多ｋｂ的条带。
各位学长学姐，请问这是怎么回事？好像出现了ｃＤＮＡ自己连接起来的现象。还有如何解决？本人小虫，没啥金币，还望见谅。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

核酸生物学实验经验 【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
无善无恶心之体
1楼 2011-06-10 13:56:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhiqiang5070

木虫 (正式写手)
上面写错了，我的cDNA为1kb多点，不是1000kb，后面2kb多点，嘿嘿。
赞一下 回复此楼
无善无恶心之体
2楼2011-06-10 14:52:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

healerly

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
3楼2011-06-10 14:56:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

1949stone(EPI+1): epi大神 2011-06-10 15:14:34
zhiqiang5070(金币+3): 你很厉害啊，可能是没连上，剩余的带应该是空载体和非特异性产物 2011-06-13 08:38:28
着实感觉很奇怪，应该是一条1KB的条带。。。
考虑没有连接上的情况，2kb很有可能是非特异性条带；
建议：
1:重新进行连接，我看你的连接体系中DNA有点太多了，可以是载体的2-3倍（浓度，这个需要你跑胶定量的）；
2：将你现在疑似含有重组载体的菌划至平板上，提取质粒，先看看能不能提取出来，能的话再做一个酶切看看。。。
赞一下(1人) 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
4楼2011-06-10 15:07:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Arrennew

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你下面的图片是什么marker啊，这么像1KB ladder 啊，那带是1k吗？每个公司的marker不一样大哦。会不会cDNA没有扩出来，而正好有gDNA污染，扩出来的是含内含子的片段啊。
赞一下 回复此楼
生命不息，探索不止。
5楼2011-06-10 20:56:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hellolin

金虫 (小有名气)
不知道楼主解决了这个问题了没有，我现在也遇到了相似的问题啊，求指教！！！
赞一下 回复此楼
scienceguy
6楼2011-10-28 17:30:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dnaxxx

至尊木虫 (小有名气)
★
西瓜(金币+1): 鼓励应助 2011-12-13 18:26:21
2k多的带应该是T载体本身，你的菌液裂解物加多了

没有你的目的条带的话应该是没有连接上
赞一下(2人) 回复此楼
7楼2011-12-13 07:59:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

547star

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2314060楼: Originally posted by dnaxxx at 2011-12-13 07:59:21:
2k多的带应该是T载体本身，你的菌液裂解物加多了

没有你的目的条带的话应该是没有连接上

同意.
回复此楼
为什么
8楼2012-05-10 18:56:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuyancheng

新虫 (初入文坛)
应该是载体的DNA条带；
1）你的载体片段是否在2000-3000bp的范围
2）你的目的片段没有连接成功，培养后增值的知识原来的载体，而无目的片段
建议：
提取质粒，用你的质粒作为对照，与剩余的PCR产物进行电泳，如果质粒的条带与PCR的条带出现亮带的位置一致，则可以确定确实为载体的DNA。
3）建议重新连接转化吧
赞一下 回复此楼
9楼2014-08-13 17:52:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zhiqiang5070 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 284求调剂 +10 Zhao anqi 2026-03-22 10/500 2026-03-24 00:08 by Equinoxhua
[考研] 一志愿武理材料工程348求调剂 +6 ￣^￣゜汗 2026-03-19 9/450 2026-03-23 19:53 by pswait
[考研] 考研化学308分求调剂 +7 你好明天你好 2026-03-23 8/400 2026-03-23 18:39 by macy2011
[考研] 上海电力大学材料防护与新材料重点实验室招收调剂研究生（材料、化学、电化学，环境） +3 我爱学电池 2026-03-23 3/150 2026-03-23 17:16 by AZMK
[考研] 328求调剂 +4 LHHL66 2026-03-23 4/200 2026-03-23 14:55 by lbsjt
[考研] 一志愿西安交通大学材料工程专业 282分求调剂 +11 枫桥ZL 2026-03-18 13/650 2026-03-22 20:26 by edmund7
[考研] 318求调剂 +4 plum李子 2026-03-21 7/350 2026-03-22 14:17 by ColorlessPI
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:09 by 星空星月
[考研] 085600材料与化工306 +4 z1z2z3879 2026-03-21 4/200 2026-03-21 23:44 by ms629
[考研] 材料学硕301分求调剂 +7 Liyouyumairs 2026-03-21 7/350 2026-03-21 22:31 by peike
[考研] 311求调剂 +3 勇敢的小吴 2026-03-20 3/150 2026-03-21 17:40 by ColorlessPI
[考研] 求调剂 +3 .m.. 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:25 by barlinike
[基金申请] 学校已经提交到NSFC，还能修改吗？ 40+4 babangida 2026-03-19 9/450 2026-03-21 16:12 by babangida
[考研] 332求调剂 +3 凤凰院丁真 2026-03-20 3/150 2026-03-21 10:27 by luoyongfeng
[考研] 初始318分求调剂（有工作经验） +3 1911236844 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:33 by JourneyLucky
[考研] 085700资源与环境308求调剂 +12 墨墨漠 2026-03-18 13/650 2026-03-21 01:42 by JourneyLucky
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +3 晨昏线与星海 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:46 by JourneyLucky
[考研] 296求调剂 +6 www_q 2026-03-18 10/500 2026-03-20 23:56 by JourneyLucky
[考研] 一志愿吉林大学材料学硕321求调剂 +11 Ymlll 2026-03-18 15/750 2026-03-20 19:40 by 丁丁*
[考研] 广西大学家禽遗传育种课题组2026年硕士招生（接收计算机专业调剂） +3 123阿标 2026-03-17 3/150 2026-03-20 15:58 by 飞行琦
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭