应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 胶回收产物连接转化后菌液PCR电泳条带出现问题
汕头大学海洋科学接受调剂
51/1返回列表
查看: 3528  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

zhiqiang5070

木虫 (正式写手)

[求助] 胶回收产物连接转化后菌液PCR电泳条带出现问题

我的cDNA胶回收后条带约1000kb强，之后连接到T载体上（将回收产物与pMD18-T载体16℃连接过夜，胶回收DNA4.5微，T载体 0.5微，SolutionI  5微升），之后转化到天根公司Ｅ.ｃｏｌｉ感受态细胞中，接菌，挑菌后摇菌。之后菌液ＰＣＲ（自己的引物和Ｍ１３引物分别跑了都差不多），可是电泳条带发生改变，出现了２０００多ｋｂ的条带。
各位学长学姐，请问这是怎么回事？好像出现了ｃＤＮＡ自己连接起来的现象。还有如何解决？本人小虫，没啥金币，还望见谅。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

核酸生物学实验经验 【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
无善无恶心之体
1楼 2011-06-10 13:56:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hellolin

金虫 (小有名气)
不知道楼主解决了这个问题了没有，我现在也遇到了相似的问题啊，求指教！！！
赞一下 回复此楼
scienceguy
6楼2011-10-28 17:30:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

zhiqiang5070

木虫 (正式写手)
上面写错了，我的cDNA为1kb多点，不是1000kb，后面2kb多点，嘿嘿。
赞一下 回复此楼
无善无恶心之体
2楼2011-06-10 14:52:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

healerly

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
3楼2011-06-10 14:56:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

1949stone(EPI+1): epi大神 2011-06-10 15:14:34
zhiqiang5070(金币+3): 你很厉害啊，可能是没连上，剩余的带应该是空载体和非特异性产物 2011-06-13 08:38:28
着实感觉很奇怪，应该是一条1KB的条带。。。
考虑没有连接上的情况，2kb很有可能是非特异性条带；
建议：
1:重新进行连接，我看你的连接体系中DNA有点太多了，可以是载体的2-3倍（浓度，这个需要你跑胶定量的）；
2：将你现在疑似含有重组载体的菌划至平板上，提取质粒，先看看能不能提取出来，能的话再做一个酶切看看。。。
赞一下(1人) 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
4楼2011-06-10 15:07:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 297求调剂 +22 ORCHID1 2026-04-10 25/1250 2026-04-13 23:11 by pies112
[考研] 085600材料与化工，求调剂 +14 won_qii 2026-04-07 14/700 2026-04-13 22:21 by pies112
[基金申请] 有爆料，一个青年教师卖房得400万，然后换了一个四青帽子 +11 babu2015 2026-04-08 11/550 2026-04-13 16:33 by probebill
[考研] 一志愿西交机械专硕求调剂 +9 求上岸的小王 2026-04-10 9/450 2026-04-13 16:08 by jiangguiquan11
[教师之家] 转长聘了 +3 简单化xn 2026-04-13 3/150 2026-04-13 14:18 by wwwkkk83
[考研] 0860004 求调剂 309分 +9 Yin DY 2026-04-08 9/450 2026-04-11 22:55 by dongdian1
[考研] 070300化学279求调剂 +19 哈哈哈^_^ 2026-04-08 20/1000 2026-04-11 20:43 by stoner78
[考研] 农学0904 312求调剂 +6 Say Never 2026-04-10 6/300 2026-04-11 10:33 by wwj2530616
[考研] 346，工科0854求调剂，专硕 +7 moser233 2026-04-10 8/400 2026-04-11 08:52 by 猪会飞
[考研] 085506-求调剂-285分 +3 雷欧飞踢 2026-04-08 3/150 2026-04-11 08:37 by zhq0425
[考研] 材料与化工调剂 +12 否极泰来2026 2026-04-10 13/650 2026-04-11 00:28 by wangjihu
[考研] 调剂 +19 小张ZA 2026-04-10 20/1000 2026-04-10 22:08 by 猪会飞
[考研] 一志愿211，化学学硕，310分，本科重点双非，求调剂 +27 努力奋斗112 2026-04-07 30/1500 2026-04-10 15:06 by Kilig0317
[考研] 求调剂 +11 翩翩一书生 2026-04-09 13/650 2026-04-10 10:27 by liuhuiying09
[考研] 085601初试330分找调剂 +10 流心奶黄包l 2026-04-09 10/500 2026-04-10 08:14 by Sammy2
[考研] 070300化学 求调剂 +13 73372112 2026-04-08 13/650 2026-04-09 20:22 by maddjdld
[考研] 材料专硕(0856) 339分求调剂 +9 哈哈哈鹅哈哈哈 2026-04-09 10/500 2026-04-09 20:01 by Orcid
[考研] 材料307分求大佬组收留 +17 Hll胡 2026-04-07 17/850 2026-04-09 10:53 by liuhuiying09
[考研] 生物学328分求调剂 +9 闪电kkl 2026-04-08 10/500 2026-04-08 21:42 by liuhuiying09
[考研] 293分求调剂，外语为俄语 +7 加一一九 2026-04-07 10/500 2026-04-08 20:14 by yutian743
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭