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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 用胶回收产物PCR的问题
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flwilliam

银虫 (小有名气)

[求助] 用胶回收产物PCR的问题

求助各位大神，我用胶回收产物做模板PCR，是想多获得一点目的基因，但为什么P出的带都是弥散装的，而且做了三次都是这个样子，恳请各位高手赐教，这到底是怎么回事啊！！！

附有图片，第一张是PCR条带（黄色线内），第二张是胶回收产物检测条带（带有点弱），第三张是以胶回收产物做为模板PCR的结果。
用胶回收产物PCR的问题
1.jpg.jpg


用胶回收产物PCR的问题-1
2.jpg


用胶回收产物PCR的问题-2
3.jpg
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1楼2013-11-03 21:11:28
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-11-04 08:33:41
flwilliam: 金币+5 2013-11-07 13:22:13
胶回收后测浓度了吗？你再次PCR的模板用量是多少？
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2楼2013-11-04 01:23:36
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flwilliam

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-04 01:23:36
胶回收后测浓度了吗？你再次PCR的模板用量是多少？

没有测浓度，难道和浓度有关系么，不管浓度时多少，也不应该P出弥散装的条带啊。
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3楼2013-11-04 13:37:50
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by flwilliam at 2013-11-04 13:37:50
没有测浓度，难道和浓度有关系么，不管浓度时多少，也不应该P出弥散装的条带啊。...

模板用量不正确会影响PCR的效果，差太多会完全P不出来的。
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2013-11-04 15:36:46
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flwilliam

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-04 15:36:46
模板用量不正确会影响PCR的效果，差太多会完全P不出来的。...

谢谢
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5楼2013-11-07 13:22:43
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wang23212

银虫 (小有名气)
怎么P的啊  
感觉引物上不去吧 P出来的基因没有引物结合域  然后就出现这样了

要是感觉产物少的话 改进一下胶回收的步骤
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6楼2013-11-18 16:41:43
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竹子小小

木虫 (小有名气)
别听楼上那些，从我们实验室的情况和我看的帖子发现胶回收的产物根本不能PCR，做了就是你这样的弥散。一定是回收里有什么东西影响了PCR
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7楼2013-12-05 18:21:03
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蜗牛婷

木虫 (正式写手)
不知道你有没有P出来，你可以试试TOUCH-DOWN的方法，可能你的模板浓度确实是太高了，适当调整模板的量，可以稀释模板做不同浓度梯度如10倍100倍1000倍稀释，然后PCR可以试试
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趁着年轻，多做些事情，给年老的自己留下些许美好的回忆。
8楼2014-01-06 14:55:52
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flwilliam

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 竹子小小 at 2013-12-05 18:21:03
别听楼上那些，从我们实验室的情况和我看的帖子发现胶回收的产物根本不能PCR，做了就是你这样的弥散。一定是回收里有什么东西影响了PCR

恩恩  后来发现胶回产物不适合做模板
好久没有没上小木虫
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9楼2014-01-10 10:11:24
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evil丶zero

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 竹子小小 at 2013-12-05 18:21:03
别听楼上那些，从我们实验室的情况和我看的帖子发现胶回收的产物根本不能PCR，做了就是你这样的弥散。一定是回收里有什么东西影响了PCR

我也是遇见这种情况，问一下具体原因是什么呢？
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10楼2016-07-21 14:55:52
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