应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 胶回收产物连接后片段大小
171/2返回列表12下一页
查看: 2188  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

ZOEY21

金虫 (小有名气)

[求助] 胶回收产物连接后片段大小

酶切产物1%琼脂糖凝胶电泳切胶回收200-1000bp片段，然后连了个接头，再跑PCR扩增后1%琼脂糖凝胶电泳检测竟然出现500-1800bp，这是怎么回事啊？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-06-26 14:01:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

loveyjc

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ZOEY21: 金币+2, ★有帮助 2012-06-26 16:24:52
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-26 16:46:52
建议你琼脂糖凝胶电泳切胶回收200-500bp片段，然后连了个接头，再跑PCR扩增后1%琼脂糖凝胶电泳检测看看，这时候差不多可以得到你需要的长度！
   另外，注意割胶时的操作！
赞一下 回复此楼
2楼2012-06-26 16:12:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ZOEY21

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by loveyjc at 2012-06-26 16:12:16
建议你琼脂糖凝胶电泳切胶回收200-500bp片段，然后连了个接头，再跑PCR扩增后1%琼脂糖凝胶电泳检测看看，这时候差不多可以得到你需要的长度！
   另外，注意割胶时的操作！

谢谢！所以是我切胶的问题吗？我切胶时电泳跑的时间不短啊，Marker的2000和1000bp分的很清楚。关键是我想回收的范围在200-1000bp。我跑PCR后出现1800多是不是说明连接出问题了啊？
赞一下 回复此楼
3楼2012-06-26 16:27:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ZOEY21: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-06-27 08:23:56
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-06-27 13:37:14
小tips: 先跑胶，后染色，能让片段大小被估计更准一些；
注意电流不要过大，温度过高也跑胶结果也有影响
赞一下 回复此楼
4楼2012-06-26 21:02:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ZOEY21

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by gaoyang636 at 2012-06-26 21:02:26
小tips: 先跑胶，后染色，能让片段大小被估计更准一些；
注意电流不要过大，温度过高也跑胶结果也有影响

谢谢！不知道是什么原因，以为是连接体系有问题。跑电泳是稳压120V，太高了吗？今天调低再试试吧...
赞一下 回复此楼
5楼2012-06-27 08:25:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

loveyjc

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-06-27 13:37:32
不是连接体系的问题，如果是连接问题，PCR就扩不出来了，肯定是跑胶或切胶的问题，可能是没跑开，小片段里混有大片段，所以建议你切的片段短一点，我以前也做过的。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

ZOEY21
6楼2012-06-27 08:47:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ZOEY21

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by loveyjc at 2012-06-27 08:47:47
不是连接体系的问题，如果是连接问题，PCR就扩不出来了，肯定是跑胶或切胶的问题，可能是没跑开，小片段里混有大片段，所以建议你切的片段短一点，我以前也做过的。

上午做了个PCR，降低电压跑了一次，条带好多了，不过我们紫外成像效果不好看不清楚。晚上再重切胶看看。
谢谢啊！敢问高人是做微卫星引物筛选吗？
赞一下 回复此楼
7楼2012-06-27 15:52:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sk_yb

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
ZOEY21: 金币+1, ★★★很有帮助, 谢谢！ 2012-06-28 08:24:39
加完接头PCR产物会增加，不过不会增加这么大。应该是电泳或marker的问题
赞一下 回复此楼
8楼2012-06-27 20:57:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ZOEY21

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by sk_yb at 2012-06-27 20:57:42
加完接头PCR产物会增加，不过不会增加这么大。应该是电泳或marker的问题

谢谢啊！原来不知道加完接头PCR什么效果。就是觉得这么大的片段太离谱，感觉有问题，也不知道在卡在哪里。
重新切了胶，改变了电泳条件，看看结果怎么样。
赞一下 回复此楼
9楼2012-06-28 08:26:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

loveyjc

金虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by ZOEY21 at 2012-06-27 15:52:57
上午做了个PCR，降低电压跑了一次，条带好多了，不过我们紫外成像效果不好看不清楚。晚上再重切胶看看。
谢谢啊！敢问高人是做微卫星引物筛选吗？...

是的
回复此楼
10楼2012-06-28 09:13:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 ZOEY21 的主题更新
171/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 294求调剂 +3 Zys010410@ 2026-03-13 4/200 2026-03-15 10:59 by zhq0425
[考研] 材料工程327求调剂 +3 xiaohe12w 2026-03-11 3/150 2026-03-14 20:20 by ms629
[考研] 337一志愿华南理工材料求调剂（有希望2吗？） +3 mysdl 2026-03-09 3/150 2026-03-14 02:53 by JourneyLucky
[考研] 333求调剂 +3 球球古力 2026-03-09 3/150 2026-03-14 01:57 by JourneyLucky
[考研] 云南财经大学信息学院计算机学硕专硕学位点 +3 zjptai 2026-03-10 5/250 2026-03-14 01:23 by 飞行琦
[考研] 0703求调剂 +7 jtyq001 2026-03-10 7/350 2026-03-14 01:06 by JourneyLucky
[考研] 337一志愿华南理工0805材料求调剂 +7 mysdl 2026-03-11 9/450 2026-03-13 22:43 by JourneyLucky
[考研] 0703，333分求调剂 一志愿郑州大学-物理化学 +3 李魔女斗篷 2026-03-11 3/150 2026-03-13 22:24 by JourneyLucky
[考研] 四川大学085601材料工程专硕 初试294求调剂 +4 祝我们好在冬天 2026-03-11 4/200 2026-03-13 21:39 by peike
[考研] （081700）化学工程与技术-298分求调剂 +12 11啦啦啦 2026-03-11 35/1750 2026-03-13 21:25 by JourneyLucky
[考研] 285化工学硕求调剂（081700） +6 柴郡猫_ 2026-03-12 6/300 2026-03-13 20:46 by hmn_wj
[考研] 332求调剂 +3 Zz版 2026-03-13 3/150 2026-03-13 20:36 by 18595523086
[考研] 材料工程调剂 +4 咪咪空空 2026-03-11 4/200 2026-03-13 19:57 by JourneyLucky
[考研] 考研调剂 +4 芬达46 2026-03-12 4/200 2026-03-13 16:04 by ruiyingmiao
[考研] 307求调剂 +5 超级伊昂大王 2026-03-12 5/250 2026-03-13 15:56 by 棒棒球手
[考研] 土木第一志愿276求调剂，科研和技能十分丰富，求新兴方向的导师收留 +3 土木小天才 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:01 by JourneyLucky
[考研] 工科0856专硕化学工程269能调剂吗 +10 我想读研11 2026-03-10 10/500 2026-03-13 10:14 by Yuyi.
[考研] 研究生招生 +3 徐海涛11 2026-03-10 7/350 2026-03-12 14:26 by 徐海涛11
[考研] 290求调剂 +3 柯淮然 2026-03-10 8/400 2026-03-11 13:48 by 柯淮然
[考研] 求调剂材料专硕293 +6 段_(:з」∠)_ 2026-03-10 6/300 2026-03-10 18:22 by ms629
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭