| 查看: 1648 | 回复: 8 | ||
mengmenglu金虫 (小有名气)
|
[求助]
ORF老是扩不出来
|
| 各位大虾，最近遇到点问题。之前扩全长已扩完，最近做表达，要把ORF片段连到PET载体上。根据ORF设计了引物，上游引物GC含量比较低，只有25%。用此引物扩CDNA时，片段大小符合，回收，连接，转化后测序，发现测序结果只有其中一条引物匹配，要么上游引物，要么下游引物，除此之外其他的碱基都不能匹配。做了好多次了，都扩不出来。后来又用了 LA Taq酶，也不行。谁能给支支招啊，这一个表达做了好几个月了，就在ORF这里卡住了。可以肯定的是ORF序列没问题。 |
回复此楼» 猜你喜欢
材料调剂
已经有4人回复
-
面上模板改不了页边距吧？
已经有6人回复
-
307求调剂
已经有6人回复
-
304求调剂
已经有5人回复
-
317一志愿华南理工电气工程求调剂
已经有8人回复
-
272求调剂
已经有3人回复
-
化工专硕348，一志愿985求调剂
已经有6人回复
-
292求调剂
已经有3人回复
-
290求调剂
已经有6人回复
-
295求调剂
已经有5人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 多个亚基蛋白 ORF串联表达
已经有9人回复
- 得到完整cDNA后，怎么找完整的DNA和确定ORF
已经有5人回复
- 看了《源代码》想出来一个剧本，求物理学空间知识。
已经有5人回复
- 如何设计引物，扩增目的基因的ORF？
已经有6人回复
- 羟基葫芦脲，一直做不出来
已经有14人回复
- 最近在做PCR，同样的体系，同样的模板，引物1能扩出来。引物2、3做不出来，去原因
已经有6人回复
- 关于会后论文扩展及期刊可靠性的问题
已经有7人回复
- 【求助/交流】完整ORF判断的软件
已经有16人回复
- 【求助/交流】为什么用纯化的PCR产物就扩不出来？？？
已经有14人回复
- 【求助/交流】5'Race反复做不出来，该怎么办
已经有74人回复
- 怎么扩不出来
已经有7人回复
2楼2011-08-22 21:42:17
mengmenglu
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 587
- 散金: 15
- 红花: 1
- 帖子: 104
- 在线: 72.2小时
- 虫号: 1056026
- 注册: 2010-07-12
- 专业: 植物化学保护
3楼2011-08-22 22:28:48
4楼2011-10-18 12:47:25
wlwabcd
铜虫 (正式写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 8688.1
- 散金: 114
- 帖子: 866
- 在线: 22.4小时
- 虫号: 1091250
- 注册: 2010-09-06
- 性别: GG
- 专业: 作物分子育种
5楼2011-10-18 15:47:41
6楼2011-10-19 21:59:46
mengmenglu
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 587
- 散金: 15
- 红花: 1
- 帖子: 104
- 在线: 72.2小时
- 虫号: 1056026
- 注册: 2010-07-12
- 专业: 植物化学保护
7楼2011-10-21 20:17:06
mengmenglu
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 587
- 散金: 15
- 红花: 1
- 帖子: 104
- 在线: 72.2小时
- 虫号: 1056026
- 注册: 2010-07-12
- 专业: 植物化学保护
8楼2011-10-21 20:17:43
9楼2018-01-13 13:47:53
