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mengmenglu金虫 (小有名气)
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ORF老是扩不出来
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| 各位大虾，最近遇到点问题。之前扩全长已扩完，最近做表达，要把ORF片段连到PET载体上。根据ORF设计了引物，上游引物GC含量比较低，只有25%。用此引物扩CDNA时，片段大小符合，回收，连接，转化后测序，发现测序结果只有其中一条引物匹配，要么上游引物，要么下游引物，除此之外其他的碱基都不能匹配。做了好多次了，都扩不出来。后来又用了 LA Taq酶，也不行。谁能给支支招啊，这一个表达做了好几个月了，就在ORF这里卡住了。可以肯定的是ORF序列没问题。 |
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