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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 得到完整cDNA后，怎么找完整的DNA和确定ORF
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zwenh1984

新虫 (初入文坛)

[求助] 得到完整cDNA后，怎么找完整的DNA和确定ORF

最近用RACE拿到几个基因完整的cDNA序列。然后我想拿到完整的DNA序列同时再次验证一下cDNA测序的结果，就设计了几对引物，提了基因组学列去P，P不出来。。。拿RNA做一步法RT，也P不出来~~~
一步法RT，没有拿试剂盒，是用的TAKARA的反转录酶，先50度，30min，再94度，2min，然后正常PCR 31个循环。。。。。
额。。。我想问的就是在拿到cDNA序列后，我想拿到带外显子的DNA序列应该以神马方法和步骤进行呢？PS，最终其实是想表达蛋白的，所以还有寻找阅读框的问题，啊啊啊，这个我也是很朦胧，网络上预测的ORF的软件，不知道是否可信。
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1楼 2011-09-27 10:51:41
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yuxia82012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

可以参考做真菌的文献，预测方法还是挺成熟的，比较可靠
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在等待中涅槃重生
2楼2011-09-27 14:47:18
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zwenh1984

新虫 (初入文坛)
做真菌的？有具体的点的方向吗
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3楼2011-09-27 15:31:22
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hc1027

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yuxia82012 at 2011-09-27 14:47:18:
可以参考做真菌的文献，预测方法还是挺成熟的，比较可靠

能列举一下比较好的具体点的文献吗？
不慎感激
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4楼2011-10-17 09:22:31
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yuxia82012

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by hc1027 at 2011-10-17 09:22:31:
能列举一下比较好的具体点的文献吗？
不慎感激

这个我也不是做真菌的，但以前看过一些类似的文献，记得这个应该有软件预测的，你上google搜搜吧
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在等待中涅槃重生
5楼2011-10-17 09:24:26
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knighteva

禁虫 (初入文坛)
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6楼2012-04-24 16:55:53
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