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得到完整cDNA后，怎么找完整的DNA和确定ORF
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最近用RACE拿到几个基因完整的cDNA序列。然后我想拿到完整的DNA序列同时再次验证一下cDNA测序的结果，就设计了几对引物，提了基因组学列去P，P不出来。。。拿RNA做一步法RT，也P不出来~~~ 一步法RT，没有拿试剂盒，是用的TAKARA的反转录酶，先50度，30min，再94度，2min，然后正常PCR 31个循环。。。。。 额。。。我想问的就是在拿到cDNA序列后，我想拿到带外显子的DNA序列应该以神马方法和步骤进行呢？PS，最终其实是想表达蛋白的，所以还有寻找阅读框的问题，啊啊啊，这个我也是很朦胧，网络上预测的ORF的软件，不知道是否可信。  |
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