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qianworkhard

新虫 (初入文坛)

[求助] 最近在做PCR,同样的体系,同样的模板,引物1能扩出来。引物2、3做不出来,去原因

最近在做PCR,同样的体系,同样的模板,引物1能扩出来,大概400多bp,在这400bp区间有设计了引物2和3,但这两段引物就什么都扩不出来?梯度也做了依旧没结果,可以肯定是引物的原因吗?






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qianworkhard

新虫 (初入文坛)

图一为引物2,图二为引物1,图三为引物3,图四为引物2、3电泳图!
2楼2011-05-31 16:56:16
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

想问一下楼主做的是神马东东?
一般PCR不都是两条引物么?
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-05-31 22:24:38
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qianworkhard

新虫 (初入文坛)

嗯,一队引物就可以了,我想要不同长短的片段。
4楼2011-06-01 08:18:12
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terry130

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

qianworkhard(金币+5): 2011-06-01 14:00:00
你的图四里那两个lane不是有片段吗??
不管怎样,用primer5 设计的引物有时也会不好用,你primer1都出来了估计不是PCR体系里药品的问题,条件方面如果你摸梯度都不成功的话建议你试一下 2 step PCR, 有时这个的成功率比较高,看你这两条primer的TA值的话你2 step PCR 的 退火+延伸的温度可以设定在65-68度之间。
摒气动方息,宁神心自明。
5楼2011-06-01 08:54:09
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qianworkhard

新虫 (初入文坛)

图四中的最下端marker为100bp,那条带应该是引物,不是目的片段!还是很感谢哦!
6楼2011-06-01 09:13:38
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terry130

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by qianworkhard at 2011-06-01 09:13:38:
图四中的最下端marker为100bp,那条带应该是引物,不是目的片段!还是很感谢哦!

那么亮的引物带不正常啊,看着像是二聚体,你再确认一下你的引物序列吧
摒气动方息,宁神心自明。
7楼2011-06-02 08:17:10
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