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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 最近在做PCR，同样的体系，同样的模板，引物1能扩出来。引物2、3做不出来，去原因
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qianworkhard

新虫 (初入文坛)

[求助] 最近在做PCR，同样的体系，同样的模板，引物1能扩出来。引物2、3做不出来，去原因

最近在做PCR，同样的体系，同样的模板，引物1能扩出来，大概400多bp，在这400bp区间有设计了引物2和3，但这两段引物就什么都扩不出来？梯度也做了依旧没结果，可以肯定是引物的原因吗？
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1楼 2011-05-31 16:53:43
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qianworkhard

新虫 (初入文坛)
图一为引物2，图二为引物1，图三为引物3，图四为引物2、3电泳图！
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2楼2011-05-31 16:56:16
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
想问一下楼主做的是神马东东？
一般PCR不都是两条引物么？
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-05-31 22:24:38
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qianworkhard

新虫 (初入文坛)
嗯，一队引物就可以了，我想要不同长短的片段。
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4楼2011-06-01 08:18:12
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terry130

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

qianworkhard(金币+5): 2011-06-01 14:00:00
你的图四里那两个lane不是有片段吗？？
不管怎样，用primer5 设计的引物有时也会不好用，你primer1都出来了估计不是PCR体系里药品的问题，条件方面如果你摸梯度都不成功的话建议你试一下 2 step PCR, 有时这个的成功率比较高，看你这两条primer的TA值的话你2 step PCR 的 退火+延伸的温度可以设定在65-68度之间。
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摒气动方息，宁神心自明。
5楼2011-06-01 08:54:09
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qianworkhard

新虫 (初入文坛)
图四中的最下端marker为100bp，那条带应该是引物，不是目的片段！还是很感谢哦!
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6楼2011-06-01 09:13:38
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terry130

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by qianworkhard at 2011-06-01 09:13:38:
图四中的最下端marker为100bp，那条带应该是引物，不是目的片段！还是很感谢哦!

那么亮的引物带不正常啊，看着像是二聚体，你再确认一下你的引物序列吧
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摒气动方息，宁神心自明。
7楼2011-06-02 08:17:10
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