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qianworkhard

新虫 (初入文坛)

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[求助] 最近在做PCR，同样的体系，同样的模板，引物1能扩出来。引物2、3做不出来，去原因

最近在做PCR，同样的体系，同样的模板，引物1能扩出来，大概400多bp，在这400bp区间有设计了引物2和3，但这两段引物就什么都扩不出来？梯度也做了依旧没结果，可以肯定是引物的原因吗？

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1楼 2011-05-31 16:53:43

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terry130

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

qianworkhard(金币+5): 2011-06-01 14:00:00

你的图四里那两个lane不是有片段吗？？
不管怎样，用primer5 设计的引物有时也会不好用，你primer1都出来了估计不是PCR体系里药品的问题，条件方面如果你摸梯度都不成功的话建议你试一下 2 step PCR, 有时这个的成功率比较高，看你这两条primer的TA值的话你2 step PCR 的退火+延伸的温度可以设定在65-68度之间。