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lihuijunle

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】PCR只有引物二聚体,有图 已有18人参与

如题:所用的引物是F338R518,F338上有GC夹子,直接用来扩增目的片段
以前这个引物我也做过,也扩的不错,体系也是原来的,但是现在每次扩总是出现引物二聚体,没有目的条带,如图所示

请教各位啦,是什么原因?
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gbrillia

银虫 (小有名气)

★ ★ ★
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reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-07-07 06:27:14
可能是模板加的少了,以前我也遇到过的,但是我的目的条带有的,当时调整一下模板的量,并且加的准一些就好了。
2楼2010-07-06 16:27:47
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clare420

新虫 (小有名气)


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提高退火温度看看
3楼2010-07-06 16:29:14
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陈思容

铜虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我现在P也是同样的情况
4楼2010-07-06 17:09:26
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lihuijunle

木虫 (正式写手)

DNA提取的量还是很足的,我稀释了100倍,目前的退火温度是60到68度,还是这样子
5楼2010-07-06 21:02:34
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苹果球球

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我也遇到过这种情况,就是模板的问题,后来调整模板量就P出来了。
6楼2010-07-06 21:29:51
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默默的等待

金虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-07-07 06:27:26
建议用GCbuffer+LA酶试试
7楼2010-07-06 22:32:48
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lihuijunle

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 苹果球球 at 2010-07-06 21:29:51:
我也遇到过这种情况,就是模板的问题,后来调整模板量就P出来了。

请教一下,你是如何调整模板量呢?我是稀释了一系列的梯度,从100倍到800倍,你用的引物和我的一样吗?我的QQ595748189,加我QQ吧,方便交流,O(∩_∩)O谢谢
8楼2010-07-06 22:51:07
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yesican

铁虫 (小有名气)


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第一次见到这东西 顶顶
9楼2010-07-06 23:06:15
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空谷幽风

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
调整模板浓度,降低退火温度试试
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
10楼2010-07-06 23:50:08
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