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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » realtimePCR引物
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xiaoyang123

金虫 (小有名气)

[求助] realtimePCR引物

想设计realtimePCR的引物，不知realtime PCR的引物和普通PCR的引物有何区别，片段大小是否有特殊要求呢？
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1楼 2012-01-04 16:11:05
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love_st

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
想设计好的引物、探针并不如想象中那么简单，需要去取舍，去比较，realtime的更是如此，不知道怎么去说，相关规则百度肯定到处都是，关键还是在于取舍
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2楼2012-01-04 16:20:59
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shaquila

金虫 (正式写手)
★
wanhscn(金币+1): 鼓励交流分享经验！ 2012-01-04 20:29:19
有很多规则，其实也有轻重的。不能有二聚体，影响扩增效率，用SYBR还有非特异性扩增。另外引物TM应该合适两步法一般反应温度都是六十度，不要轻易改，因为你可能要多个基因在一个体系跑，太低的TM在六十度影响结合效率，引物太长结合效率也会降低，而且非特异性扩增也会增加
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3楼2012-01-04 18:48:50
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sweetbobo

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木(金币+1): 鼓励积极分享经验 2012-01-05 10:54:42
建议你使用专业的软件
beacon desinger  或者 primer premier
版本等级越高越好，绝对好用的！
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4楼2012-01-05 09:33:47
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xiaomc37

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般
引物自动搜索可采用“Premier Primer 5”软件，
而引物的评价分析则可采用“Oligo 6”软件
O(∩_∩)O~
片段不超过250bp为好
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5楼2012-01-05 14:33:01
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ccharlien

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
看你用染料还是探针
软件用 primer express或者beacon desinger 有对应的选项 别的软件用不到
原则什么的一搜一大把 应用软件的时候调参数就是了
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6楼2012-01-05 22:47:03
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ccharlien

木虫 (正式写手)
★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励应助。染料法的话一般的引物设计软件也ok啦 2012-01-05 22:59:23
抱歉 之前软件名写错了
是Primer Express或者Beacon Designer
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7楼2012-01-05 22:49:06
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alicejie2005

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我就是用Primer5.0设计的，也可以用，就是设计了很多，挑了一对最好的
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感动你我的开心，是我们共同的冥想
8楼2012-03-02 09:21:19
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whb21

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
Real-Time的引物和普通PCR的引物是一样的，
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9楼2012-03-02 10:21:19
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137167741

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般的引物的注意点，都必须注意，此外，还有要跨内含子设计，片段长度不能太长大概100~200bp即可，等等
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总有一天我要修改用户名。
10楼2012-03-02 10:39:02
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