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请问pcr产物约为450bp的大小，可以用来做 real time RT-PCR吗？已有1人参与
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如题，我现在设计的引物所能扩增出来的产物只有400多bp的专一性最好，扩增效率也非常理想，所以我想用这对引物做real time pcr， 可以吗？我也试过了设计其他引物来扩增100到200bp左右的产物，但是都不适合做real time pcr. 急，求回复。感谢有经验的高手解答疑惑！ |
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还有一个问题想要请教一下 一直在困惑我 我在提取RNA想要做逆转录之后半定量，事实上实验室条件有限 RNA很多时候都有降解，我打算用16s作为内参，在做半定量的额时候没问题吧？目的RNA降解，16S也跟着降解 但是老师说解效率不一样，因为RNA酶水解是随机的，那么片段越长的RNA其水解几率越大，同时不同批次样品提取的目的RNA和16S降解情况也不一样，所以最好是不要降解的，（但是我们实验室做的RNA都有不同程度的降解）我在想即使每一批的内参和目的片段水解的效率不一致，但是对于同一批的样品来说他们也是按照一定的长度比例来被水解的，所以只要内参被我们固定了，按照比例那么目的片段就被我们固定了，那么即使降解的厉害，但是也是应该可以做半定量以及定量的。RNA的完整性不需要太好，目的基因能扩出来就行，能半定量就行，不知道这个想法对不对 因为关系到我后面的实验方案是否要改 感激不尽 谢谢 |
8楼2013-12-30 10:11:49
cicelyzh
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