24小时热门版块排行榜    

查看: 3005  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

wybiology

捐助贵宾 (小有名气)

[求助] 请问pcr产物约为450bp的大小,可以用来做 real time RT-PCR吗? 已有1人参与

如题,我现在设计的引物所能扩增出来的产物只有400多bp的专一性最好,扩增效率也非常理想,所以我想用这对引物做real time pcr, 可以吗?我也试过了设计其他引物来扩增100到200bp左右的产物,但是都不适合做real time pcr.
急,求回复。感谢有经验的高手解答疑惑!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 冷雁孤旅 at 2013-12-30 10:11:49
还有一个问题想要请教一下 一直在困惑我  我在提取RNA想要做逆转录之后半定量,事实上实验室条件有限 RNA很多时候都有降解,我打算用16s作为内参,在做半定量的额时候没问题吧?目的RNA降解,16S也跟着降解 但是老 ...

用于做定量的RNA样品最好是没有降解的。你的导师说得对,不同的RNA的降解程度是不同的。由于mRNA是否有降解是很难判断的,只能以rRNA的完整性来推测。rRNA的质量越好,做出的定量数据越可信。
9楼2013-12-30 14:07:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2013-12-26 13:00:35
可以,不要超过500bp,注意内参扩增片段大小要和目的基因片段基本一样大。
2楼2013-12-26 11:04:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冷雁孤旅

木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-26 11:04:40
可以,不要超过500bp,注意内参扩增片段大小要和目的基因片段基本一样大。

请问一下  为什么内参需要和目的基因一样大 是因为扩增时间的原因么
生命不息奋斗不止
3楼2013-12-26 19:18:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 冷雁孤旅 at 2013-12-26 19:18:29
请问一下  为什么内参需要和目的基因一样大 是因为扩增时间的原因么...

不是的。因为扩增片段的长短的差异会影响逆转录时的效率。同一PCR程序扩增不同大小的片段也会稍有差别。
4楼2013-12-27 08:05:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 让我中一个面上吧! +4 大萍1987 2026-08-20 4/200 2026-08-20 20:22 by ran2233
[基金申请] 时间戳又变了 +12 wuchongjun 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:05 by spzhao
[基金申请] 科研孤儿太难了 +10 我4大白菜 2026-08-20 10/500 2026-08-20 20:04 by littlezl
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +21 yaoyewhu2008 2026-08-20 22/1100 2026-08-20 17:03 by yaoyewhu2008
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+3 snowwithsea 2026-08-19 12/600 2026-08-20 15:56 by lfy8008
[基金申请] 言之凿凿,明天官网会通知放榜? +14 医学老男孩 2026-08-20 16/800 2026-08-20 15:47 by LNP@mRNA
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +14 kkkl_v 2026-08-19 15/750 2026-08-20 08:21 by sunzitan
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低?主要原因有哪些? +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +4 yuleib84 2026-08-19 5/250 2026-08-19 19:52 by hhs666
[基金申请] 今天放榜吗? +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
信息提示
请填处理意见