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swallow52u

银虫 (正式写手)

[求助] RT-PCR 试验中扩增片段大小?

我做的是大鼠骨骼肌GLUT4这个基因mRNA的表达,我参考了两篇文献这个基因的引物,我想知道PCR扩增出来的片段是不是应该一样大小! 还有就是我参考的文献上的引物,但文献中没有写扩增的片段是多大,我怎样确定我PCR产物的片段大小!
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andy99990000

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): 鼓励交流 2011-05-15 09:46:06
swallow52u(金币+1): 谢谢你啊 !我就是不能确定我做的结果对不对,我电泳的结果很好!片段长度是150,但和参考文献不一样啊! 2011-05-16 01:13:31
swallow52u(金币+1): 2011-05-22 10:41:20
如果只是想粗略估计片段大小,直接跑胶对比marker条带就能知道大致长度。

如果要具体到确定是不是目的条带,就做基因克隆,再拿去测序。通过与Genbank序列比对就能知道你要的答案了。希望能有帮助吧~
2楼2011-05-15 03:48:07
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cdl007

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): 鼓励交流 2011-05-15 09:46:24
swallow52u(金币+1): 谢谢啊 !我这就下载啊! 2011-05-16 01:14:02
下载个primer5 的软件
将原始序列拷进去,再输入引物序列,自动寻找匹配,然后就能看到扩增片段究竟多长了
3楼2011-05-15 06:45:00
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cdl007

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

swallow52u(金币+1): 谢谢学习了啊! 2011-05-16 01:14:33
补充一下,pcr产物不是一定要一般大的,根据你的引物在序列的位置不同,它们之间的距离不同,扩增出的大小也不同
4楼2011-05-15 06:46:28
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疯狂修行者

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): 鼓励交流 2011-05-15 09:46:38
swallow52u(金币+1): 谢谢指导啊 ! 2011-05-16 01:15:06
你既然知道自己的目的基因,可以通过电子PCR得到你要的大小。其实就是在其他该基因的序列上,找到你的引物位置,可以借助软件(如Primer5、DNAman等)完成,这样知道大概的大小。然后根据跑电泳,对Marker知道具体大小,然后回收测序,比对序列,确定是不是你要的基因,同时也知道了你的基因准确大小。
戒骄戒躁,坦荡做人,平常心做事,享受生活之美!!
5楼2011-05-15 08:46:17
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