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xy19860508铜虫 (小有名气)
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[求助]
反转录之后PCR扩增片段问题的请教，急急急
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小弟，最近在对流感病毒的HA基因片段进行扩增（先提RNA进行反转录，完成之后再进行的扩增），在扩增之前为保证RNA模板的存在，先用HA基因的小片段引物（300bp）进行扩增，呈阳性之后才做的大片段（1700bp）扩增。图1为我做的退火温度梯度的图片，在D,G泳道出现了明显的目的条带，但是E泳道不知道是什么东西。 但是在确定好的条件下，再用样本进行PCR扩增是，没有目的条带出现，而呈现出图2这种情况。不知道这种情况为什么东西导致的，求教。。(为什么同样的反应条件，试剂也是一样的，则出现完全没有目的条带呢) 在找不到原因的情况下，我又重新抽提了RNA，并且也做了短片段的扩增，没有问题之后。用保真酶来扩增大的片段，则呈现出了以下的情况，求解答。 小弟在此求教，急啊。赶着毕业啊，请大家多多指点，拜谢了  为退火温度优化   保真酶的扩增图片 |
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xy19860508
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【答案】应助回帖
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