应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请教两条片段通过PCR桥接扩增的方法
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
111/2返回列表12下一页
查看: 3252  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

noheartman

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】请教两条片段通过PCR桥接扩增的方法 已有9人参与

我有两段DNA，其中一段1.5Kb,另外一段只有60bp,想通过PCR桥接的方法把它们连接起来再进行扩增，想得到1500+60的片段，请教大虾，该怎么做才好。本来计划通过单独的PCR加酶切位点扩增后，胶回收连接起来，但60bp的DNA回收起来有困难，要不有好的回收方法也可以，请赐教。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-07-27 21:54:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hyw1989960

木虫 (正式写手)

快乐家族二十八
★
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-07-27 23:43:27
第二个片段也太小了，做融合PCR也不好做，1500与1500+60估计电泳也看不出区别
赞一下(1人) 回复此楼
快乐家族
2楼2010-07-27 21:59:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunyongle1

木虫 (正式写手)
★
noheartman(金币+1): 2010-07-28 15:25:09
lstt09nk(金币+1):正解~~ 2010-07-29 09:34:37
确实不太好办，你干脆直接把60bp合成引物算了。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-07-27 23:14:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

junior850621

铁杆木虫 (著名写手)
noheartman(金币+1): 2010-07-28 15:25:02
同意二楼
回复此楼
4楼2010-07-28 00:16:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jasco

木虫 (正式写手)
noheartman(金币+1): 2010-07-28 15:24:59
引用回帖:
Originally posted by sunyongle1 at 2010-07-27 23:14:27:
确实不太好办，你干脆直接把60bp合成引物算了。

这个才是正解！
回复此楼
5楼2010-07-28 11:31:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
noheartman(金币+1): 2010-07-28 15:24:48
同意直接合成一条八十几个碱基的长引物（与长序列有20多个bp的重叠区），然后跟长序列上的引物PCR就可以。。。
    短片段回收 直接乙醇沉淀就行。。。
赞一下 回复此楼
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
6楼2010-07-28 11:36:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

steamsn

金虫 (小有名气)
noheartman(金币+1): 2010-07-28 15:24:54
同意楼上的意见，直接将其作为引物的来进行PCR
赞一下 回复此楼
我命由我不由天
7楼2010-07-28 11:38:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

noheartman

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by jasco at 2010-07-28 11:31:03:


这个才是正解！

80多个碱基的引物，我以前没有做过，那Tm值会超高，那是不是只要两步法呢，退火和延伸合并成一步呢？
赞一下 回复此楼
8楼2010-07-28 15:32:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zxping11230

铁虫 (小有名气)
如果模板是质粒的话，80多个碱基的引物可以与30多的常规引物搭配的，我经常这样做 没问题。而且简单，只是扩增时最好用高保真酶！
赞一下 回复此楼
快乐的科研
9楼2010-07-28 17:24:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zxping11230

铁虫 (小有名气)
没必要两步法，就常规PCR
赞一下 回复此楼
快乐的科研
10楼2010-07-28 17:25:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 noheartman 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 348求调剂 +5 wukira 2026-04-04 5/250 2026-04-05 11:05 by xiayan13521
[考研] 0703总分331求调剂 +10 ZY-05 2026-04-04 13/650 2026-04-05 11:03 by xiayan13521
[考研] 313求调剂 +3 海日海日 2026-04-04 3/150 2026-04-05 07:57 by 544594351
[考研] 一志愿北京2，材料与化工308求调剂 +10 熊二想上岸 2026-04-04 10/500 2026-04-05 05:20 by houyaoxu
[考研] 323分（计算机视觉和大模型项目）能直接上手 +3 chaoxiicy 2026-04-01 3/150 2026-04-05 00:50 by chongya
[考研] 11408,335分，本科211，求调剂，可转专业 +5 鳄梨大鳄鱼 2026-04-03 5/250 2026-04-04 22:49 by chongya
[考研] 土木304求调剂 +4 兔突突突， 2026-03-31 4/200 2026-04-04 13:34 by 1753564080
[考研] 材料专业383求调剂 +8 郭阳阳阳成 2026-04-03 8/400 2026-04-04 10:29 by Rednal.
[考研] 266求调剂 +8 学员97LZgn 2026-04-03 8/400 2026-04-04 09:02 by 20021109
[考研] 070300一志愿211，312分求调剂院校 +16 小黄鸭宝 2026-03-30 16/800 2026-04-03 19:53 by lijunpoly
[考研] 319求调剂 +18 太容易1018 2026-04-01 18/900 2026-04-03 11:18 by linyelide
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +6 崔wj 2026-04-02 6/300 2026-04-03 10:19 by 蓝云思雨
[考研] 材料调剂 +4 一样YWY 2026-04-03 4/200 2026-04-03 09:48 by 蓝云思雨
[考研] 生物学308分求调剂（一志愿华东师大） +6 相信必会光芒万� 2026-03-31 7/350 2026-04-02 23:16 by JourneyLucky
[考研] 环境工程297分求调剂一志愿杭高院 +15 GENJIOW 2026-03-31 16/800 2026-04-02 17:56 by cyh—315
[考研] 一志愿北京科技大学085601材料工程英一数二初试总分335求调剂 +9 双马尾痞老板2 2026-04-01 9/450 2026-04-02 12:14 by oooqiao
[考研] 085601一志愿中山大学深圳材料工程330求调剂 +8 pipiver 2026-03-30 8/400 2026-04-02 12:01 by ms629
[考研] 324求调剂 +5 想上学求调 2026-04-01 6/300 2026-04-02 10:16 by sanrepian
[考研] 考研材料工程351分调剂 +5 整个好的 2026-03-31 5/250 2026-04-01 09:36 by topgun2009
[考研] 085601英二数二求调剂 总分325 +4 余航航 2026-03-31 4/200 2026-03-31 17:38 by 唐沐儿
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭