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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】PCR扩增核心片段,再也扩不出来了,怎么办已有11人参与

自己设计引物做PCR扩增一核心片段,以前扩出来过,并且很特异,带很亮,回收了,转化没成功,重新扩,再也扩不出来了,怎么办?现在所有的试剂、反应条件都跟以前一摸一样,PCR后跑电泳却只有很长的拖带,请问是怎么回事?如何才能重新把那条带扩出来?
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不知道什么是生活了,也不知道生活是什么了
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
估计是模板降解了,重新制备下模板试试。另外,PCR的时候作平行的两管。
3楼2010-06-13 08:21:08
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普通回帖

xpb2005

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
模板是以前的还是重提的?
2楼2010-06-12 20:39:59
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by xpb2005 at 2010-06-12 20:39:59:
模板是以前的还是重提的?

模板没问题,扩b-actin扩的很好
不知道什么是生活了,也不知道生活是什么了
4楼2010-06-13 11:26:48
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by lixg at 2010-06-13 08:21:08:
估计是模板降解了,重新制备下模板试试。另外,PCR的时候作平行的两管。

模板没问题,新提的RNA做的反转录,b-actin扩的很好啊,就是我要的那条带扩不出来,做了很多次了,也做了很多平行了
不知道什么是生活了,也不知道生活是什么了
5楼2010-06-13 11:49:58
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xpb2005

银虫 (小有名气)


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引用回帖:
Originally posted by 阳光金鱼唐 at 2010-06-13 11:26:48:

模板没问题,扩b-actin扩的很好

那我觉得只能是再重复了,坚持再坚持,我也遇到和你一样的问题,师姐去年做出来了,今年来了再做就做不出来了,跑胶泳道全白。能传一张你的图片吗/
6楼2010-06-13 21:08:02
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dhd997

荣誉版主 (文坛精英)

自由人,我型我秀!

优秀版主


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
好好想想哪里出问题了吧?
人生不过几十年,成败荣辱都在天,是非恩怨莫在意,健康快乐最值钱,自古人间苦无边,看得高远境如仙,愿你不为凡事恼,轻松快乐每一天。
7楼2010-06-13 21:12:22
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★
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lstt09nk(金币+1):欢迎多多交流~~ 2010-06-14 21:54:55
actin无内含子,如果模板有基因组污染的话,actin引物扩的是以actin的 DNA为模板p的产物,因此即使actin能扩出来,也不能说明你的mRNA没问题。
8楼2010-06-14 10:38:01
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by xpb2005 at 2010-06-13 21:08:02:

那我觉得只能是再重复了,坚持再坚持,我也遇到和你一样的问题,师姐去年做出来了,今年来了再做就做不出来了,跑胶泳道全白。能传一张你的图片吗/

图片没存下来,看着没有就没存,就是很长的白色拖带
不知道什么是生活了,也不知道生活是什么了
9楼2010-06-15 12:18:34
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microsome

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
还是上次合成的引物吗   如果是   夏季的温度变化有影响  选个凉快的天气试试
10楼2010-06-15 21:14:46
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