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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】PCR扩增核心片段,再也扩不出来了,怎么办已有11人参与

自己设计引物做PCR扩增一核心片段,以前扩出来过,并且很特异,带很亮,回收了,转化没成功,重新扩,再也扩不出来了,怎么办?现在所有的试剂、反应条件都跟以前一摸一样,PCR后跑电泳却只有很长的拖带,请问是怎么回事?如何才能重新把那条带扩出来?
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不知道什么是生活了,也不知道生活是什么了
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by xpb2005 at 2010-06-12 20:39:59:
模板是以前的还是重提的?

模板没问题,扩b-actin扩的很好
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4楼2010-06-13 11:26:48
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by lixg at 2010-06-13 08:21:08:
估计是模板降解了,重新制备下模板试试。另外,PCR的时候作平行的两管。

模板没问题,新提的RNA做的反转录,b-actin扩的很好啊,就是我要的那条带扩不出来,做了很多次了,也做了很多平行了
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5楼2010-06-13 11:49:58
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by xpb2005 at 2010-06-13 21:08:02:

那我觉得只能是再重复了,坚持再坚持,我也遇到和你一样的问题,师姐去年做出来了,今年来了再做就做不出来了,跑胶泳道全白。能传一张你的图片吗/

图片没存下来,看着没有就没存,就是很长的白色拖带
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9楼2010-06-15 12:18:34
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by microsome at 2010-06-15 21:14:46:
还是上次合成的引物吗   如果是   夏季的温度变化有影响  选个凉快的天气试试

是最近重新合成的引物。估计是模板有问题,也许这个基因冬天和夏天的表达量不一样,之前是冬天取的样,很好扩,现在试了很多样,怎么也扩不出来
不知道什么是生活了,也不知道生活是什么了
11楼2010-06-16 12:33:57
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