| 查看: 1626 | 回复: 6 | |||
| 本帖产生 2 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | |||
dingjunrong木虫 (小有名气)
|
[求助]
PCR总是无法正确扩增所需片段，问题在哪？
|
||
|
我要扩增的是一个属的特异性片段1900bp,本来以为引物有问题，又合了一遍，还是扩不出，郁闷啊~ 20ul体系：ddH2O 14.1ul 10×PCR Buffer 2ul dNTP 2ul 引物各0.5ul 模板0.5ul TaqE 0.4 ul PCR反应程序：95度 5min 95度 1min 55度 1min 72度 3min 72度 10min 30个循环 求高人分析 电泳图如下：从左向右：marker10000,阳性样品，空白对照。marker条带由小至大：250bp,500bp,1000bp,2000bp,.......  |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有158人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有8人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 反转录之后PCR扩增片段问题的请教，急急急
已经有5人回复
- 大片段PCR扩增求助
已经有34人回复
- 高GC含量基因片段PCR问题
已经有13人回复
- 基因组中长片段PCR应该注意的几个问题
已经有14人回复
- PCR扩增问题
已经有5人回复
- PCR扩增出现的问题
已经有9人回复
- 16S PCR扩增的问题
已经有11人回复
- 【求助/交流】荧光PCR扩增曲线问题
已经有18人回复
- 【求助/交流】为什么PCR扩增产物片段长度比设计时的要长很多？
已经有10人回复
- 【求助/交流】PCR扩增核心片段，再也扩不出来了，怎么办
已经有16人回复
- 【求助/交流】5500bp的片段PCR问题
已经有21人回复
【答案】应助回帖
1949stone(EPI+1): 鼓励 2011-05-11 12:41:36
dingjunrong(金币+2): 2011-11-07 09:54:42
dingjunrong(金币+2): 2011-11-07 09:54:42
|
我看了你的反应体系的成分后，觉得： 1、你的模板太少；实在不行模板量用4ul都可以。 2、dNTP的浓度如果是100mM的话，用量就只要0.4ul 。 3、相信退火温度的确定，不用说了吧。不过个人认为退火温度影响不是很大。 4、如果实在不行，就再次设计引物吧？尽量找保守区设计引物。 你试一试这个反应体系吧？ 20ul体系： ddH2O 14.4ul 10×PCR Buffer 2ul dNTP 0.4ul 引物 各0.4ul 模板 2ul TaqE 0.4 ul |
2楼2011-05-11 11:05:04
lly198784
木虫 (正式写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 2357.5
- 散金: 30
- 帖子: 411
- 在线: 151.2小时
- 虫号: 716835
- 注册: 2009-03-07
- 性别: MM
- 专业: 生物化工与食品化工
3楼2011-05-11 11:21:45
lly198784
木虫 (正式写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 2357.5
- 散金: 30
- 帖子: 411
- 在线: 151.2小时
- 虫号: 716835
- 注册: 2009-03-07
- 性别: MM
- 专业: 生物化工与食品化工
4楼2011-05-11 11:24:18
天使托
专家顾问 (职业作家)
T.Shen
-
专家经验: +57 - MolEPI: 106
- 应助: 95 (初中生)
- 贵宾: 0.263
- 金币: 16348.8
- 散金: 593
- 红花: 74
- 沙发: 9
- 帖子: 3652
- 在线: 289小时
- 虫号: 441757
- 注册: 2007-10-27
- 专业: 微生物生理与生物化学
- 管辖: 微生物
5楼2011-05-11 16:53:21
syn1985
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 15 (小学生)
- 金币: 2765.5
- 散金: 60
- 红花: 3
- 帖子: 578
- 在线: 273.2小时
- 虫号: 463029
- 注册: 2007-11-19
- 性别: MM
- 专业: 病原细菌与放线菌生物学
6楼2011-05-17 17:55:14
7楼2011-05-18 16:15:33
