应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】5500bp的片段PCR问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
221/3返回列表123下一页
查看: 2578  |  回复: 21
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zxyjenny6

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】5500bp的片段PCR问题 已有18人参与

各位大侠：本人最近在做一段5500bp的目的基因的PCR，采用的是takara的EX TAQ酶，选择的引物应该没有问题，按照相关原则设定了反应条件，并且在此基础上稍作改变尝试了几次，但都没有P出来。想请问各位，有没有什么好的建议或者应该怎样改进反应条件，能把我要的目的基因P出来。O(∩_∩)O谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-04-24 15:25:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

墨香若水

木虫 (著名写手)

小小囧虫
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 2010-04-25 13:11
设计的引物稍长点 循环次数减短
赞一下(3人) 回复此楼
仕不可不弘毅，任重而道远
4楼2010-04-24 16:52:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

shengwufenzi

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+2): 2010-04-25 13:11
你做的片段有些大，肯定不好做的。再有一方法是先扩增此基因的一部分片段，再酶切后做反向PCR，不过难度也是挺大的，实在不行，你可以试试
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-04-24 16:22:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gastrodia

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 2010-04-25 13:11
扩增长片段的时候，你的模板一定要纯，
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2010-04-24 16:52:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luizing

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
做的片段太大
要多摸索条件
赞一下(1人) 回复此楼
知识改变命运
5楼2010-04-24 17:02:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

308145157

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+2): 2010-04-25 13:11
试试换个酶吧，用过KOD-FX东洋纺的，这个酶扩5k多的片段还是很轻松的，据说最多做到过1w7k，我用来P过7k的一点问题没有。
赞一下(2人) 回复此楼
心若在，梦就在......
6楼2010-04-24 17:23:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

阿娇

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+2): 2010-04-25 13:11
你扩的片段太长，72度延伸时间应该延长。平常小片段是30s到1min。我扩4kbp的用3min。也是用Takara的酶，你扩5k多的应该要4min吧。可能3min也行了。祝你成功
赞一下(2人) 回复此楼
7楼2010-04-24 20:22:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuanfeng

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+2): 2010-04-25 13:12
扩的片段太长了吧，扩长片段我们一般用的是trans的fastpfu，一般20s 1Kb，5.5kb延伸2min应该足够了，而且保真性很好。条件就是一般的条件，我们做过以保存的菌液做模板p4kb的基因，效果很好的。
赞一下(2人) 回复此楼
8楼2010-04-24 21:24:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zjzz

木虫 (正式写手)

在通往变态的坦途上
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+3): 2010-04-25 13:12
以前扩6K的片段用的是一种高延展的酶，哪家公司的我给忘了。
保真性如何不清楚，没测过序，因为只是做检测
一开始没扩出来，后来发现是提取的细菌总DNA不够好，可能是有机试剂没去干净
最后往体系里加了点DMSO就出来了
赞一下(2人) 回复此楼
终于熬成木虫了……
9楼2010-04-25 07:35:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zxyjenny6

新虫 (小有名气)
1949stone:祝你成功 2010-04-25 13:12
我用的引物已经挺长了，加上酶切位和保护碱基都快40了，只不过用的模板不是提取的DNA，因为以前P别的时候都可以直接挑菌就可以了。延伸的时间也足够长，而EX TAQ貌似也是高保真的，看来只能先多试试了，实在不行再考虑换酶了。谢谢大家了哈
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2010-04-25 12:52:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zxyjenny6 的主题更新
221/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +7 张.1 2026-04-05 7/350 2026-04-05 20:40 by 啵啵啵0119
[考研] 一志愿生物与医药，296分，求调剂 +9 66鹿 2026-04-03 10/500 2026-04-05 20:11 by lys0704
[考研] 0817化学工程与技术求调剂，一志愿中海洋319 +13 lv945 2026-04-04 13/650 2026-04-05 18:14 by 猪会飞
[考研] 298求调剂 +3 manman511 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:09 by kk112233
[考研] 328分调剂 +6 门men 2026-04-04 6/300 2026-04-05 13:40 by imissbao
[考研] 272求调剂 +4 电气李 2026-04-05 4/200 2026-04-05 10:41 by lbsjt
[考研] 353求调剂 +10 MayUxw1 2026-04-03 10/500 2026-04-05 09:23 by 无际的草原
[考研] 材料调剂 +7 dxy调剂 2026-04-04 7/350 2026-04-05 09:15 by 陌秋26
[考研] 调剂0855-288 +5 x熊二a 2026-04-03 5/250 2026-04-04 00:19 by 猪会飞
[考研] 305求调剂 +3 77Qi 2026-04-03 3/150 2026-04-03 23:01 by qzxyhcsy
[考研] 五邑大学土木工程招调剂生2026 +3 wyutj 2026-03-31 4/200 2026-04-03 18:21 by zengxj_7201
[考研] 求调剂不挑专业 +3 xrh030412 2026-04-01 3/150 2026-04-03 14:40 by 氮气气气
[考研] 求调剂 +3 心想事成可 2026-04-03 3/150 2026-04-03 11:22 by wangjy2002
[考研] 考研调剂 +3 李木子0120 2026-04-02 5/250 2026-04-02 21:45 by dongzh2009
[考研] 372分材料与化工（085600）一志愿湖南大学求调剂 +5 蓝笺片 2026-04-02 6/300 2026-04-02 21:37 by dongzh2009
[考研] 279求调剂 +7 莫xiao 2026-04-01 7/350 2026-04-01 22:05 by 客尔美德
[考研] 265求调剂 +11 yelck 2026-04-01 12/600 2026-04-01 19:12 by 549790059
[考研] 285求调剂 +7 AZMK 2026-03-30 13/650 2026-04-01 17:00 by 七度不信任
[考研] 一志愿中海洋320化学工程与技术学硕求调剂 +8 披星河 2026-03-30 8/400 2026-03-31 08:53 by lbsjt
[考研] 材料专硕 085600求调剂 +7 BBQ233 2026-03-30 7/350 2026-03-30 17:44 by oooqiao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭