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zxyjenny6

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】5500bp的片段PCR问题 已有18人参与

各位大侠:本人最近在做一段5500bp的目的基因的PCR,采用的是takara的EX TAQ酶,选择的引物应该没有问题,按照相关原则设定了反应条件,并且在此基础上稍作改变尝试了几次,但都没有P出来。想请问各位,有没有什么好的建议或者应该怎样改进反应条件,能把我要的目的基因P出来。O(∩_∩)O谢谢!
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墨香若水

木虫 (著名写手)

小小囧虫

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 2010-04-25 13:11
设计的引物稍长点 循环次数减短
仕不可不弘毅,任重而道远
4楼2010-04-24 16:52:38
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查看全部 22 个回答

shengwufenzi

金虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+2): 2010-04-25 13:11
你做的片段有些大,肯定不好做的。再有一方法是先扩增此基因的一部分片段,再酶切后做反向PCR,不过难度也是挺大的,实在不行,你可以试试
2楼2010-04-24 16:22:48
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gastrodia

金虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 2010-04-25 13:11
扩增长片段的时候,你的模板一定要纯,
3楼2010-04-24 16:52:30
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luizing

银虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
做的片段太大
要多摸索条件
知识改变命运
5楼2010-04-24 17:02:11
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