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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】大片段pcr问题
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xutao

金虫 (著名写手)

第三军团总参谋

[交流] 【求助/交流】大片段pcr问题 已有4人参与

请教有p过大片段的高手，我p的片段有5kb，p了很多次了，都没看到目的条带。甚至连引物二聚体都看不到？求高手指导？？？？
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第三军团
1楼 2010-09-20 17:14:32
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sfxt001

木虫 (小有名气)
★
reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-09-21 06:09:17
5K不算很大的片段吧？造成你说的情况的原因很多，比如引物设计的有问题，你用的酶扩增能力不好，PCR的条件没有优化，模板质量不好等等。
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2楼2010-09-20 21:58:37
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xutao

金虫 (著名写手)

第三军团总参谋
引用回帖:
Originally posted by sfxt001 at 2010-09-20 21:58:37:
5K不算很大的片段吧？造成你说的情况的原因很多，比如引物设计的有问题，你用的酶扩增能力不好，PCR的条件没有优化，模板质量不好等等。

引物已经设计过两对了，模板是质粒也重新提取了应该不是这两个问题，想问下你用的什么酶呢？我用的pyrobest。
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第三军团
3楼2010-09-21 09:57:35
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sfxt001

木虫 (小有名气)
xutao(金币+10): 2010-09-21 12:05:57
引用回帖:
Originally posted by xutao at 2010-09-21 09:57:35:

引物已经设计过两对了，模板是质粒也重新提取了应该不是这两个问题，想问下你用的什么酶呢？我用的pyrobest。

我扩10几K的片段是用的是Primstar
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4楼2010-09-21 10:09:24
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xutao

金虫 (著名写手)

第三军团总参谋
引用回帖:
Originally posted by sfxt001 at 2010-09-21 10:09:24:

我扩10几K的片段是用的是Primstar

谢谢，我也用下primstar吧，
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第三军团
5楼2010-09-21 12:07:08
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love_st

金虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk:这两个酶混合应该有个比例吧~ 2010-09-21 14:34:29
pfu加上taq，优化下buffer，肯定没问题
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6楼2010-09-21 13:54:55
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love_st

金虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
比例是有的，不过你可以参考一些文献，自己去看吧
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7楼2010-09-21 17:36:13
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
La-Taq应该可以。
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Thank-you，so-blue.
8楼2010-09-25 09:22:32
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samma

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
native pfu
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9楼2010-09-25 10:41:28
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