应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 【求助/交流】大片段连接转化成功与否问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
121/2返回列表12下一页
查看: 2118  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

小米一粒m

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】大片段连接转化成功与否问题 已有6人参与

我的载体是pWL89a，电泳带大小5000bp多，单酶切切开后电泳带将近8000bp，目的片段4000bp左右，连接转化后有单菌落长出，挑菌培养后提质粒，质粒电泳后大小却略在4000bp左右，有可能插入后片段跑电泳的大小比原载体小吗？对引物进行特异性扩增扩出的目的条带大小正确，有可能是目的片段自连吗？请高手支招，谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-07-27 19:31:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小米一粒m

新虫 (初入文坛)
scelab:交流贴请勿纯表！自己的也不行 2010-07-27 23:44:24
2楼2010-07-27 19:32:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rosalie161

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
把质粒单酶切开，看能扩出你的目的条带不。
赞一下(1人) 回复此楼
Rosalei.....
3楼2010-07-27 21:08:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunyongle1

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
以前我也遇到类似的情况，PCR扩出来了，但是就是大小感觉不对。吓得我也没敢用。只好多挑了几个克隆，当时挑了十个，只有一个对的。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2010-07-27 23:18:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小米一粒m

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by sunyongle1 at 2010-07-27 23:18:50:
以前我也遇到类似的情况，PCR扩出来了，但是就是大小感觉不对。吓得我也没敢用。只好多挑了几个克隆，当时挑了十个，只有一个对的。

你说最后挑出一个对的，那个成功的电泳大小是不是比环状载体大呢？其余九个是比环状载体小吗？PCR都能扩出目的条带是吧？
赞一下 回复此楼
5楼2010-07-28 10:28:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小米一粒m

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by rosalie161 at 2010-07-27 21:08:06:
把质粒单酶切开，看能扩出你的目的条带不。

嗯，是个好办法，不确定的话就要这样检验了
赞一下 回复此楼
6楼2010-07-28 10:30:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunyongle1

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 小米一粒m at 2010-07-28 10:28:57:
你说最后挑出一个对的，那个成功的电泳大小是不是比环状载体大呢？其余九个是比环状载体小吗？PCR都能扩出目的条带是吧？

至于是不是比环状载体大，我忘了。但是大小肯定是不对的。不过PCR都扩出来了。
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2010-07-28 12:29:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小米一粒m

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by sunyongle1 at 2010-07-28 12:29:07:

至于是不是比环状载体大，我忘了。但是大小肯定是不对的。不过PCR都扩出来了。

那你说的有一个对的，你是怎么判断是对的呢？测序吗？
赞一下 回复此楼
8楼2010-07-28 13:24:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunyongle1

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
直接酶切鉴定，看到酶切后有我的载体，和目的片段。而且大小都对。要是不切的话，大小等于载体和片段的和
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2010-07-28 13:34:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zgb1982

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by rosalie161 at 2010-07-27 21:08:06:
把质粒单酶切开，看能扩出你的目的条带不。

什么意思啊？我不太懂这样做有什么好处呢？
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2010-07-28 14:39:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 小米一粒m 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 283分求调剂 +9 试试看呗 2026-04-04 9/450 2026-04-05 10:27 by 果冻大王
[考研] 一志愿电子科技大学085600材料与化工 329分求调剂 +10 Naiko 2026-04-04 10/500 2026-04-05 09:40 by sam3303
[考研] 280求调剂 +3 李rien 2026-04-04 3/150 2026-04-04 23:32 by lqwchd
[考研] 材料调剂 +11 一样YWY 2026-04-02 13/650 2026-04-04 23:10 by 无际的草原
[考研] 285求调剂 +4 AZMK 2026-04-04 5/250 2026-04-04 16:45 by cql1109
[考研] 材料专业383求调剂 +8 郭阳阳阳成 2026-04-03 8/400 2026-04-04 10:29 by Rednal.
[考研] 265求调剂 +17 林深温澜 2026-04-01 20/1000 2026-04-04 01:09 by userper
[考研] 工科341分调剂 +3 洛多罗 2026-04-03 3/150 2026-04-03 14:20 by 1753564080
[考研] 专硕085601求调剂 +7 suyifei 2026-04-03 8/400 2026-04-03 14:00 by 欣喜777
[考研] 求调剂 +9 akdhjs 2026-03-31 11/550 2026-04-03 13:32 by akdhjs
[考研] 275求调剂 +14 waltzh 2026-04-01 14/700 2026-04-03 11:24 by qqq850810
[考研] 338求调剂，一志愿能源动力，外语是日语203 +5 zzz，，r 2026-04-02 5/250 2026-04-03 09:45 by 蓝云思雨
[考研] 调剂 +7 祉岷. 2026-04-02 7/350 2026-04-03 09:11 by 花呗还欠600
[考研] 一志愿同济大学323分（080500）求调剂 +6 yikeniu 2026-04-01 6/300 2026-04-02 14:19 by smileboy2006
[考研] 0710生物学，325求调剂 +3 mkkkkkl 2026-04-01 3/150 2026-04-02 09:48 by Jaylen.
[考研] 379求调剂 +3 ?苦瓜不苦 2026-04-01 3/150 2026-04-01 20:09 by 暮云清寒
[考研] 086000生物与医药 初试274求调剂 +5 小叮当来了 2026-03-30 6/300 2026-04-01 14:25 by mxj1203
[考研] 【调剂】一志愿厦大生物与医药调剂 +3 Echo虾米 2026-03-31 3/150 2026-04-01 08:40 by JourneyLucky
[考研] 复试调剂 +7 双马尾痞老板2 2026-03-31 7/350 2026-03-31 19:49 by Dyhoer
[考研] 279求调剂 +12 j的立方 2026-03-29 12/600 2026-03-30 20:30 by dick_runner
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭