24小时热门版块排行榜    

查看: 3269  |  回复: 17

tdhslxiaoyao

新虫 (小有名气)

[求助] 连接转化不成功问题

各位好,我做连接转化,可是在平板上长不出来菌落。错误排除:实验操作,因为已经很细心的转了两次。我感觉如果是连接的问题,我的片段是2、3Kb的大小,如果没有连上,如果空载体转入细胞中,那也应该长出来菌落呀,为什么平板上连个假阳性的菌也没有?两次都失败,特郁闷,求解答,谢谢。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

xiezhenrong

金虫 (正式写手)

北斗星

【答案】应助回帖


lstt09nk(金币+1): 感谢交流 2011-12-08 12:26:30
建议做一组平行实验:1.感受态细胞直接涂板2.空载体转化感受态细胞3.与目的片段同样处理的载体转化感受态细胞4.连接体系转化感受态细胞再分析原因
海阔凭鱼跃,天高任鸟飞!
8楼2011-12-04 19:58:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

斌斌1990

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-12-03 19:31:28
我觉得有以下几点可能:
1、感受态细胞有问题,建议换批感受态试试,你们的感受态是自己做的吗?是电转还是化转啊?
2、抗性浓度太高了,楼主用的是什么抗性啊?
科研路漫漫修远,吾将实验而求索
2楼2011-12-03 15:31:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

超然渡陈之家

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


lstt09nk(金币+1): 恩 2011-12-10 10:46:11
你觉得是连接的问题最好把你的连接体系详细点列出来才好分析啊。
3楼2011-12-03 16:59:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linyingjia

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

涂布太热   烫死啦?
4楼2011-12-03 18:42:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhen_fang

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

居然有人说是被烫死,楼主你信吗?
5楼2011-12-04 14:06:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinpeng_6118

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你感受态的问题吧
人生百态原为海,看破红尘方为岸!
6楼2011-12-04 14:14:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我爱沈泉

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


lstt09nk(金币+1): 鼓励交流 2011-12-10 10:46:34
有可能 培养基里面 抗生素 是不是加多拉?遇到这种情况应该 多做一点空白对照实验啊 比如直接涂感受态。。 连一下其他的基因片段看一下连接的整个体系个能做出来 希望能帮助你拉 谢谢啊
7楼2011-12-04 15:03:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

丫头7976

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我也一直做连接转化,有的时候也是一个不长,有的时候长很多,挑菌落提质粒却没有连上,哎 不知道咋回事,你的片段和载体大小分别是多少,可以交流一下
9楼2011-12-05 10:50:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tdhslxiaoyao

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 斌斌1990 at 2011-12-03 15:31:02:
我觉得有以下几点可能:
1、感受态细胞有问题,建议换批感受态试试,你们的感受态是自己做的吗?是电转还是化转啊?
2、抗性浓度太高了,楼主用的是什么抗性啊?

感受态是公司买的,trans5a,我用的是42度热击转化。
用的是AMP的抗性,浓度应该没有问题,同批次其他同学做都是这样。
今天又做了一次,明天看看
10楼2011-12-07 22:10:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 tdhslxiaoyao 的主题更新
信息提示
请填处理意见