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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 连接转化不成功问题
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tdhslxiaoyao

新虫 (小有名气)

[求助] 连接转化不成功问题

各位好，我做连接转化，可是在平板上长不出来菌落。错误排除：实验操作，因为已经很细心的转了两次。我感觉如果是连接的问题，我的片段是2、3Kb的大小，如果没有连上，如果空载体转入细胞中，那也应该长出来菌落呀，为什么平板上连个假阳性的菌也没有？两次都失败，特郁闷，求解答，谢谢。
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1楼 2011-12-03 09:42:36
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

xiezhenrong

金虫 (正式写手)

北斗星

【答案】应助回帖

★
lstt09nk(金币+1): 感谢交流 2011-12-08 12:26:30
建议做一组平行实验：1.感受态细胞直接涂板2.空载体转化感受态细胞3.与目的片段同样处理的载体转化感受态细胞4.连接体系转化感受态细胞再分析原因
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海阔凭鱼跃，天高任鸟飞！
8楼2011-12-04 19:58:51
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普通回帖

斌斌1990

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-12-03 19:31:28
我觉得有以下几点可能：
1、感受态细胞有问题，建议换批感受态试试，你们的感受态是自己做的吗？是电转还是化转啊？
2、抗性浓度太高了，楼主用的是什么抗性啊？
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科研路漫漫修远，吾将实验而求索
2楼2011-12-03 15:31:02
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超然渡陈之家

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
lstt09nk(金币+1): 恩 2011-12-10 10:46:11
你觉得是连接的问题最好把你的连接体系详细点列出来才好分析啊。
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3楼2011-12-03 16:59:47
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linyingjia

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

涂布太热   烫死啦？
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4楼2011-12-03 18:42:14
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zhen_fang

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

居然有人说是被烫死，楼主你信吗？
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5楼2011-12-04 14:06:34
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jinpeng_6118

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你感受态的问题吧
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人生百态原为海，看破红尘方为岸！
6楼2011-12-04 14:14:42
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我爱沈泉

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
lstt09nk(金币+1): 鼓励交流 2011-12-10 10:46:34
有可能 培养基里面 抗生素 是不是加多拉？遇到这种情况应该 多做一点空白对照实验啊 比如直接涂感受态。。 连一下其他的基因片段看一下连接的整个体系个能做出来 希望能帮助你拉 谢谢啊
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7楼2011-12-04 15:03:41
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丫头7976

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我也一直做连接转化，有的时候也是一个不长，有的时候长很多，挑菌落提质粒却没有连上，哎 不知道咋回事，你的片段和载体大小分别是多少，可以交流一下
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9楼2011-12-05 10:50:45
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tdhslxiaoyao

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 斌斌1990 at 2011-12-03 15:31:02:
我觉得有以下几点可能：
1、感受态细胞有问题，建议换批感受态试试，你们的感受态是自己做的吗？是电转还是化转啊？
2、抗性浓度太高了，楼主用的是什么抗性啊？

感受态是公司买的，trans5a,我用的是42度热击转化。
用的是AMP的抗性，浓度应该没有问题，同批次其他同学做都是这样。
今天又做了一次，明天看看
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10楼2011-12-07 22:10:50
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