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tdhslxiaoyao

新虫 (小有名气)

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9楼: Originally posted by 丫头7976 at 2011-12-05 10:50:45:
我也一直做连接转化,有的时候也是一个不长,有的时候长很多,挑菌落提质粒却没有连上,哎 不知道咋回事,你的片段和载体大小分别是多少,可以交流一下

没有连上那是假阳性啊,载体自连啦。
我用的是3:1的比例,今天我加大了比例试试,看效果怎么样。
11楼2011-12-07 22:12:15
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新虫 (小有名气)

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5楼: Originally posted by zhen_fang at 2011-12-04 14:06:34:
居然有人说是被烫死,楼主你信吗?

哈哈,这还别说,也有这个可能,我就是怕被热死,所以晾了好久才敢涂布。呵呵,我的是没有这个可能
12楼2011-12-07 22:14:18
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新虫 (小有名气)

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6楼: Originally posted by jinpeng_6118 at 2011-12-04 14:14:42:
你感受态的问题吧

同批次做过其他片段的转化,感受态是可以的
13楼2011-12-07 22:14:56
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新虫 (小有名气)

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7楼: Originally posted by 我爱沈泉 at 2011-12-04 15:03:41:
有可能 培养基里面 抗生素 是不是加多拉?遇到这种情况应该 多做一点空白对照实验啊 比如直接涂感受态。。 连一下其他的基因片段看一下连接的整个体系个能做出来 希望能帮助你拉 谢谢啊

恩,我也这样想,以后再做做吧
14楼2011-12-07 22:16:04
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新虫 (小有名气)

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8楼: Originally posted by xiezhenrong at 2011-12-04 19:58:51:
建议做一组平行实验:1.感受态细胞直接涂板2.空载体转化感受态细胞3.与目的片段同样处理的载体转化感受态细胞4.连接体系转化感受态细胞再分析原因

额,这个代价有点高哈,我曾经有这样的想法,一直没有敢做,呵呵,实在不行会做的
15楼2011-12-07 22:18:26
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dasheng1980

铁杆木虫 (知名作家)

大圣

我也觉得是感受态细胞的问题,如果感受细胞不合适,就不会表达你的产物,我们同事遇到过,不过连菌都不长就不知是咋回事了。
dasheng1980
16楼2011-12-09 20:43:07
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eileen8519

金虫 (小有名气)

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16楼: Originally posted by dasheng1980 at 2011-12-09 20:43:07:
我也觉得是感受态细胞的问题,如果感受细胞不合适,就不会表达你的产物,我们同事遇到过,不过连菌都不长就不知是咋回事了。

我用过同样的感受态细胞转化质粒,以前构建好的质粒转化Rosetta后,平板中长了很多菌落,但是后来构建好的质粒转化同样的Rosetta,结果未长菌落,这个可能是啥子原因呢?
17楼2012-04-17 16:04:07
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eileen8519

金虫 (小有名气)

我也遇到了同样的问题,请问你现在解决了吗,我们可以交流交流。
18楼2012-04-17 16:05:41
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