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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 连接转化不成功问题
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tdhslxiaoyao

新虫 (小有名气)
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9楼: Originally posted by 丫头7976 at 2011-12-05 10:50:45:
我也一直做连接转化，有的时候也是一个不长，有的时候长很多，挑菌落提质粒却没有连上，哎 不知道咋回事，你的片段和载体大小分别是多少，可以交流一下

没有连上那是假阳性啊，载体自连啦。
我用的是3：1的比例，今天我加大了比例试试，看效果怎么样。
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11楼2011-12-07 22:12:15
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tdhslxiaoyao

新虫 (小有名气)
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5楼: Originally posted by zhen_fang at 2011-12-04 14:06:34:
居然有人说是被烫死，楼主你信吗？

哈哈，这还别说，也有这个可能，我就是怕被热死，所以晾了好久才敢涂布。呵呵，我的是没有这个可能
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12楼2011-12-07 22:14:18
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tdhslxiaoyao

新虫 (小有名气)
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6楼: Originally posted by jinpeng_6118 at 2011-12-04 14:14:42:
你感受态的问题吧

同批次做过其他片段的转化，感受态是可以的
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13楼2011-12-07 22:14:56
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tdhslxiaoyao

新虫 (小有名气)
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7楼: Originally posted by 我爱沈泉 at 2011-12-04 15:03:41:
有可能 培养基里面 抗生素 是不是加多拉？遇到这种情况应该 多做一点空白对照实验啊 比如直接涂感受态。。 连一下其他的基因片段看一下连接的整个体系个能做出来 希望能帮助你拉 谢谢啊

恩，我也这样想，以后再做做吧
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14楼2011-12-07 22:16:04
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tdhslxiaoyao

新虫 (小有名气)
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8楼: Originally posted by xiezhenrong at 2011-12-04 19:58:51:
建议做一组平行实验：1.感受态细胞直接涂板2.空载体转化感受态细胞3.与目的片段同样处理的载体转化感受态细胞4.连接体系转化感受态细胞再分析原因

额，这个代价有点高哈，我曾经有这样的想法，一直没有敢做，呵呵，实在不行会做的
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15楼2011-12-07 22:18:26
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dasheng1980

铁杆木虫 (知名作家)

大圣
我也觉得是感受态细胞的问题，如果感受细胞不合适，就不会表达你的产物，我们同事遇到过，不过连菌都不长就不知是咋回事了。
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dasheng1980
16楼2011-12-09 20:43:07
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eileen8519

金虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by dasheng1980 at 2011-12-09 20:43:07:
我也觉得是感受态细胞的问题，如果感受细胞不合适，就不会表达你的产物，我们同事遇到过，不过连菌都不长就不知是咋回事了。

我用过同样的感受态细胞转化质粒，以前构建好的质粒转化Rosetta后，平板中长了很多菌落，但是后来构建好的质粒转化同样的Rosetta，结果未长菌落，这个可能是啥子原因呢？
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17楼2012-04-17 16:04:07
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eileen8519

金虫 (小有名气)
我也遇到了同样的问题，请问你现在解决了吗，我们可以交流交流。
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18楼2012-04-17 16:05:41
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